P27kipk和ki-67蛋白在病理性瘢痕组织中的表达和意义(1)
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[摘要]目的：研究病理性瘢痕组织中P27kipl和ki-67蛋白的表达情况及其相互关系，探讨他们在瘢痕形成中的作用及机制。方法：应用免疫组化SP法检测正常皮肤、成熟瘢痕、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中P27kipl、ki-67蛋白的表达并进行统计学分析。结果：病理性瘢痕组织中P27kipl蛋白表达显著低于正常皮肤、成熟瘢痕(P=0.036); ki-67蛋白在病理性瘢痕组织中的表达显著高于正常皮肤、成熟瘢痕(P<0.000)；病理性瘢痕组织中P27kipl的表达与ki-67蛋白表达呈负相关(P<0.000)。结论：P27kipl蛋白表达的下降及ki-67的表达升高可能与病理性瘢痕的形成有关。
[关键词]P27kipl蛋白；ki-67蛋白；增生性瘢痕；瘢痕疙瘩
[中图分类号]Q813 [文献标识码]A[文章编号]1008-6455(2008)10-1477-03
Expression and significance of P27kipl and ki-67 protein in pathological scar
, 百拇医药
WU Wen-yi,ZHU Shi-ze,WU Rui-lan,ZOU Cheng-hao,WANG Zhao-yang,HUANG Zhong-xin
(Departent ofPlastic Surgery,the Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University,Quanzhou362000,Fujian,China)
Abstract:ObjectiveTo study the expression of P27kipl and ki-67 in the pathological scars and their reaction-ship and to investigate its role and its possible mechanism in the pathogenesis of abnormal scars.MethodsImmunohistochemiscal technique was performered to detect the expression and distribution of P27kipl and ki-67 protein in hypertrophic scar (42cases), keloid (18cases), normal scar (40 cases) and normal skin (50cases),statistics was used to analyze the data.ResultsThe positive rate of P27kipl and ki-67 protein expression were remarkably significant in comparison between normal scar and abnormal scar(P<0.05). In pathological scar the protein of P27kipl and ki-67 showed a strong inverse correlation (P<0.000). ConclusionLow expression of P27kipl and high expression of ki-67 may play an important role in the proliferation of fibroblasts and in the pathogenesis of pathological scar.
, 百拇医药
Key words: P27kipl protein；ki-67 protein；hypertrophic scar；keloid
增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是临床上最常见的病理性瘢痕，其形成机制仍不十分清楚。近年来研究表明，病理性瘢痕的形成是以细胞的增生和凋亡失衡为基础的[1-2]。深入研究细胞增殖和凋亡在病理性瘢痕形成中的作用，将有利于揭示其发病机制。P27kipl 是一种广谱的周期蛋白依赖性激酶抑制剂，是G1/S期限制的重要调控分子。ki-67是被公认的反映细胞增殖活性的标志物。我们应用免疫组化方法，检测了增生性瘢痕、瘢痕疙瘩组织中P27kipl、 ki-67蛋白的表达情况，并与成熟瘢痕；正常皮肤作了比较，初步探讨P27kipl、ki-67的表达与病理性瘢痕形成的关系，为瘢痕的防治提拱一定实验依据。
1材料和方法
1.1 组织标本：瘢痕疙瘩标本18例，其中男性11例，女性7例，年龄4～37岁，平均21岁。部位：胸骨前10例，面颈肩部4例，耳垂部和臀部4例。术前均未做化疗和放疗，1年内无局部注射、外用药物，瘢痕局部无治疗；增生性瘢痕42例，男26例，女16例，年龄3～47岁，所取部位与瘢痕疙瘩基本相近；同时于手术时取瘢痕周围正常皮肤50例；另取成熟瘢痕组织40例，瘢痕病程均为6个月以上，最长123个月，平均16个月，均经临床和病理确诊，无恶性变。标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，贴于涂有0.05%多聚赖氨酸的载玻片备用。
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1.2 主要试剂：鼠抗人P27kipl 单克隆抗体(ZM-03040)、鼠抗人ki-67单克隆抗体(ZM-0165)、SP免疫组化超敏染色试剂盒和DAB显色试剂盒(均购自福州迈新生物技术公司)。
1.3 方法：标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，4μm连续切片，作SP法免疫组化染色。用已知的上述抗体染色阳性的组织作阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。SP法参试剂盒的说明进行。
1.4 结果判定：①P27kipl 阳性细胞为细胞核、细胞质都有着色，胞质染色稍深，有时可见胞质中成云团状的深染区。ki-67阳性细胞呈棕褐色定位于细胞核。每例随机计数10个高位视野(×400)，确定每一个视野的阳性率(每个视野计数500个成纤维细胞或皮肤基底细胞，取平均数，即为阳性细胞数)；②P27kipl 染色判断标准参照文献[3]：阳性表达细胞数≤10%为0分，10%～30%为1分，30%～60%为2分，>60%为3分；阳性细胞表达的着色深度：基本不差色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分，两者得分相乘，少于1分的病例判定为表达阴性，其余的病例判定为表达阳性。ki-67： 根据阳性细胞数所占百分率,得出标记指数(labeling index,LI)。
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1.5 统计学处理：P27kipl染色差异采用χ2 检验, 不同组别ki-67及P27kipl与ki-67相互关系采用t检验，应用SPS11.5的软件包对数握进行统计和分析。
2结果
2.1 P27kipl、ki-67蛋白在瘢痕和正常皮肤组织中的表达情况：见表1、表2。
2.2 免疫细胞化学染色结果发现，P27kipl蛋白在瘢痕组织、正常细胞细胞核、细胞质都有着色，胞质染色稍深，有时可见胞质中成云团状的深染区(如图1、图2)，P27kipl蛋白在病理性瘢痕组织中表达与其在正常皮肤、成熟瘢痕中的表达有显著性差异(P=0.036)。, 百拇医药(吴文艺 朱世泽 吴瑞兰 邹承浩 王朝阳 黄种心)