1.2.2真核表达载体pcDNA3.1-VEGF165的构建 具体过程详见文献[2]。

    1.2.3 脂质体介导下VEGF165转染MSCs：于转染前1 天，将原代培养的骨髓基质细胞用2.5g/L的胰酶消化、计数，并按1×109 细胞/L 接种于6孔板中。当细胞长满至90%～95%时，将pcDNA3.1- VEGF165转染大鼠骨髓基质细胞(同时设立未转染的空白对照)，具体操作按LipofetAMINE2000试剂盒中的说明书进行，将转染的细胞置于37℃、5%CO2孵箱中培养24h (期间不必换液)。翌日，以G418(300 mg/L)进行筛选，3天换液1次，培养14 天后，获得阳性细胞克隆。

    1.2.4 MSCs与β-磷酸三钙复合体的构建：将体积为5mm×2mm×2mm的β-磷酸三钙24块用蒸馏水洗净，超声净化2次×20min，自然干燥，高压灭菌。VEGF165基因转染的MSCs经G418筛选后，将转染MSCs收集达到所需细胞密度(5×106)，种植到β-TCP上。然后，MSCs-β-磷酸三钙复合体置入37℃、5%CO2孵箱，培养7天，隔日换液。

    1.2.5 MSCs-β-磷酸三钙复合体异位种植：在全麻下将MSCs-β-磷酸三钙复合体各2块分别回植到每只大鼠背部的肌肉内 ......