1.3 皮肤成纤维细胞原代培养及传代:取健康青少年男子环切术后的包皮,利用组织块培养法,将皮肤组织放入无菌烧杯中,用含有青霉素,链霉素各100U/ml的PBS反复冲洗,直至液体为无色透明。将皮肤组织放入无菌培养皿中,用眼科剪将皮下组织剪去,剪碎皮肤为近似糊状。将剪碎的组织分成小块贴于25cm2 培养瓶瓶底,组织块之间间隔0.5cm,将瓶底翻转后加入含20%小牛血清的DMEM 9ml后放入细胞培养箱培养4h后翻转使培养液浸没组织块,培养4天后隔日换液,2周后成纤维细胞爬出,待融合80%后常规消化传代,取第5代对数增殖期细胞作为实验用细胞。

    1.4 实验细胞分组和不同浓度TGF-β₁干预细胞后UVA照射体外培养的成纤维细胞:将细胞以每孔1×105/ml浓度接种在6 孔板上,细胞分为5组,即正常对照组(UVA 0 J/cm2 +TGF-β₁ 0ng/ml)、UVA单纯照射组(UVA15J/cm2 +TGF-β₁ 0ng/ml)、小剂量组(UVA 15J/ cm2+TGF-β₁ 0.1 ng/ml)、中剂量组(UVA 15J/cm2 +TGF-β₁ 1.0ng/ml)、大剂量组(UVA15 J/cm2 +TGF-β₁ 10.0 ng/ml) ......