血管钠肽通过抑制白细胞L-选择素表达保护碾压撕脱皮瓣(2)
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1.3统计学处理:实验数据以x±s表示,用SPSS12.0(SPSS Inc. Chicago, Illinois)统计软件处理,组间比较用采用方差分析,P﹤0.05,差异有显著性。
2结果
2.1 皮瓣成活率:通过我们的前期工作已证明,使用我科自行研制的皮肤碾压伤模型可以制作出稳定可重复的碾压皮瓣。皮瓣碾压后,组织自远端1/3开始逐渐发生干性坏死,随着时间推移,原本看似有活力的组织也开始发生坏死表现,表皮脱屑、变硬等继发性坏死特征相继出现,至术后7天坏死和成活组织呈现明显界限。此时计算各组皮瓣的成活率(皮瓣成活率=皮瓣存活表面积/皮瓣总表面积×100),结果如下:A组(SHAM): 61.12±4.92;B组(单纯碾压撕脱):37.42±4.36;C组(碾压撕脱+VNP):49.96±1.32。 可以看出VNP治疗能显著提高皮瓣的成活面积(P<0.05),减少继发性坏死的发生。
2.2 组织损伤和白细胞浸润:为进一步了解碾压伤后组织损伤情况和VNP的作用,我们选择在伤后12h于皮瓣中远1/3交界处取材,进行组织学检测。HE染色见SHAM手术组皮瓣组织形态正常、结构完整,未见明显炎细胞浸润,微血管中血流通畅(图1)。碾压撕脱组皮瓣可见组织的形态和完整性遭到明显破坏,大量炎细胞浸润,血管内可见明显中性粒细胞大量出现,部分管腔内充满中性粒细胞,可见白细胞贴壁,有附壁血栓形成(图2)。VNP治疗组皮瓣组织损伤情况得到明显改善:组织虽有水肿,但其形态结构尚完整,炎细胞浸润较单纯碾压皮瓣有明显减少,大多聚集在血管壁外周,管腔内充血,仅有少量中性粒细胞存在于管腔之中,可见白细胞附壁现象,尚未见明显血栓形成(图3)。
2.3 L-选择素免疫组织化学染色:L-选择素表达于多种白细胞,包括中性粒细胞、单核细胞等,是介导白细胞与内皮细胞初始作用和滚动的主要黏附分子[4],因此我们挑选了L-选择素这一指标来研究白细胞在碾压撕脱伤中的作用。术前各组切片中L-选择素表达未见明显差异(P>0.05)。术后12h切片:SHAM手术组中L-选择素阳性表达的细胞不多,多呈黄色、棕黄色等弱阳性表现(图4);碾压撕脱组皮瓣可观察到大量L-选择素阳性表达的细胞,且呈棕褐色的强阳性表现,并其多位于管腔内及血管周围,尤其在管腔内呈大量聚集表现,这与中性粒细胞聚集部位相一致,证明了在碾压撕脱伤早期白细胞因L-选择素的高表达而聚集于管腔之中,并最终渗出浸润至组织各处参与炎性反应过程(图5);VNP治疗组中L-选择素的表达较碾压撕脱组明显减少,散在于管腔及内皮细胞周围,说明VNP较好地抑制了白细胞在炎症反应中的作用(图6) ......
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