婵犵妲呴崑鎾跺緤妤e啯鍋嬮柣妯款嚙杩濋梺璺ㄥ櫐閹凤拷
闂傚倷绀侀幖顐︽偋韫囨稑绐楅幖娣妼閸ㄥ倿鏌ㄩ悤鍌涘: 闂佽娴烽弫濠氬磻婵犲洤绐楅柡鍥╁枔閳瑰秴鈹戦悩鍙夋悙婵☆偅锕㈤弻娑㈠Ψ閵忊剝鐝栭悷婊冨簻閹凤拷 闂傚倷绶氬ḿ鑽ゆ嫻閻旂厧绀夐幖娣妼閸氬綊骞栧ǎ顒€鐏柍缁樻礋閺屻劑寮崹顔规寖濠电偟銆嬮幏锟� 闂備浇宕垫慨宥夊礃椤垳鐥梻浣告惈椤戝倿宕滃┑鍫㈢煓濠㈣泛澶囬崑鎾绘晲鎼粹€崇缂備椒绶ら幏锟� 闂傚倷鑳舵灙妞ゆ垵鍟村畷鏇㈡焼瀹ュ懐鐣洪悗骞垮劚椤︻垳鐥閺屾稓浠﹂悙顒傛缂備胶濯撮幏锟� 闂傚倷鑳堕、濠勭礄娴兼潙纾块梺顒€绉撮崹鍌炴煛閸愩劎澧涢柣鎺曨嚙椤法鎹勯搹鍦紘濠碉紕鍎戦幏锟� 闂傚倷鑳剁涵鍫曞疾閻愭祴鏋嶉柨婵嗩槶閳ь兛绶氬畷銊╁级閹寸媭妲洪梺鑽ゅТ濞层倕螣婵犲洤绀夐柨鐕傛嫹 婵犵數鍋為崹鍫曞箰鐠囧唽缂氭繛鍡樺灱婵娊鏌曟径鍡樻珔缂佲偓瀹€鍕仯闁搞儜鍕ㄦ灆闂佸憡妫戦幏锟� 闂傚倷娴囬崑鎰版偤閺冨牆鍨傚ù鍏兼儗閺佸棝鏌ㄩ悤鍌涘 闂備浇顕х€涒晠宕樻繝姘挃闁告洦鍓氶崣蹇涙煥閻曞倹瀚� 婵犵數鍋為崹鍫曞箹閳哄懎鍌ㄩ柣鎾崇瘍閻熸嫈鏃堝川椤撶媭妲洪梺鑽ゅТ濞层倕螣婵犲洤绀夐柨鐕傛嫹 闂傚倷绀侀幉锟犮€冭箛娑樼;闁糕剝绋戦弸渚€鏌熼幑鎰靛殭缂佺姵鍨块弻锟犲礋椤愶絿顩伴梺鍝ュ櫐閹凤拷
婵犵數鍎戠徊钘壝洪敂鐐床闁稿本绋撻々鐑芥煥閻曞倹瀚�: 闂傚倷绀侀幖顐﹀磹閻戣棄纭€闁告劕妯婂〒濠氭煥閻曞倹瀚� 闂備浇宕垫慨鏉懨洪妶鍥e亾濮樼厧鐏︽い銏$懇閺佹捇鏁撻敓锟� 闂備浇宕甸崰鎰版偡閵夈儙娑樷槈閵忕姷锛涢梺璺ㄥ櫐閹凤拷 闂備焦鐪归崺鍕垂闁秵鍋ら柡鍥ュ灪閸庡﹪鏌ㄩ悤鍌涘 闂傚倷鐒﹂惇褰掑磹閺囩喐娅犻柦妯侯樈濞兼牠鏌ㄩ悤鍌涘 闂傚倷鐒﹂惇褰掑磿閸楃伝娲Ω閿旇棄寮块梺璺ㄥ櫐閹凤拷 闂傚倷鑳舵灙缂佺粯顨呴悾鐑芥偨缁嬫寧鐎梺璺ㄥ櫐閹凤拷 闂傚倷鑳堕崕鐢稿磻閹捐绀夐煫鍥ㄦ尵閺嗐倝鏌ㄩ悤鍌涘 闂傚倷鑳堕、濠勭礄娴兼潙纾规俊銈呮噹缁犳牠鏌ㄩ悤鍌涘 闂傚倷娴囬鏍礂濞嗘挸纾块柡灞诲劚閻ら箖鏌ㄩ悤鍌涘 闂傚倷鑳舵灙妞ゆ垵鍟村畷鏇㈠箻椤旂瓔妫呴梺璺ㄥ櫐閹凤拷 缂傚倸鍊搁崐绋棵洪妶鍡╂闁归棿绶¢弫濠囨煥閻曞倹瀚� 婵犵數鍋為崹鍫曞箰閸洖纾归柡宥庡幖閻掑灚銇勯幒鎴敾閻庢熬鎷� 闂傚倷鑳堕崢褍顕i幆鑸汗闁告劦鍠栫粈澶愭煥閻曞倹瀚� 闂傚倷鐒﹀鍨熆娓氣偓楠炲繘鏁撻敓锟� 婵犵數濞€濞佳囧磻婵犲洤绠柨鐕傛嫹 闂傚倷鑳堕崢褎鎯斿⿰鍫濈闁跨噦鎷� 闂備浇顕х换鎰殽韫囨稑绠柨鐕傛嫹 闂傚倷鐒﹂幃鍫曞磿閼碱剛鐭欓柟杈惧瘜閺佸棝鏌ㄩ悤鍌涘 闂備浇宕垫慨鏉懨洪埡浣烘殾闁割煈鍋呭▍鐘绘煥閻曞倹瀚� 闂傚倷绀侀幖顐⒚洪敃鈧玻鍨枎閹惧秴娲弫鎾绘晸閿燂拷
婵犵數鍋為崹鍫曞箹閳哄懎鍌ㄩ柤娴嬫櫃閻掑﹪鏌ㄩ悤鍌涘: 闂備焦鐪归崺鍕垂闁秵鍋ら柡鍥ュ灪閸庡﹪鏌ㄩ悤鍌涘 闂傚倷娴囧銊╂倿閿曞倹鍋¢柨鏇楀亾瀹€锝呮健閺佹捇鏁撻敓锟� 闂傚倷娴囬鏍礈濮樿鲸宕查柛鈩冪☉閻掑灚銇勯幒鎴敾閻庢熬鎷� 婵犵數鍋為崹鍫曞箹閳哄懎鐭楅柍褜鍓涢埀顒冾潐閹碱偊骞忛敓锟� 闂傚倷绀侀幉锟犳偋閻愯尙鏆﹂柣銏⑶圭粻鏍煥閻曞倹瀚� 婵犵數鍋為崹鍫曞箰鐠囧唽缂氭繛鍡樺灱婵娊鏌ㄩ悤鍌涘 闂傚倸鍊峰ù鍥涢崟顖涘亱闁圭偓妞块弫渚€鏌ㄩ悤鍌涘 濠电姵顔栭崰妤勬懌闂佹悶鍔忓▔娑滅亱闂佽法鍣﹂幏锟� 闂傚倷绀侀幖顐﹀磹缁嬫5娲Χ閸ワ絽浜剧痪鏉款槹鐎氾拷 闂傚倷鐒﹂崹婵嬫倿閿曞倸桅闁绘劗鏁哥粈濠囨煥閻曞倹瀚� 婵犲痉鏉库偓妤佹叏閹绢喖瀚夋い鎺戝閽冪喖鏌ㄩ悤鍌涘 闂傚倷鐒﹂幃鍫曞磿閹绘帞鏆︽俊顖欒濞尖晠鏌ㄩ悤鍌涘 婵犵绱曢崑娑㈩敄閸ヮ剙绐楅柟鎹愵嚙閸戠娀鏌ㄩ悤鍌涘 闂傚倷娴囬崑鎰版偤閺冨牆鍨傞柧蹇e亝濞呯娀鏌ㄩ悤鍌涘 闂傚倷娴囬崑鎰版偤閺冨牆鍨傛い鏍ㄧ矌缁犳棃鏌ㄩ悤鍌涘 闂傚倷娴囬崑鎰版偤閺冨牆鍨傞柟娈垮枤閸楁岸鏌ㄩ悤鍌涘 闂傚倷绀侀幖顐﹀磹鐟欏嫬鍨旈柦妯侯槺閺嗐倝鏌ㄩ悤鍌涘 闂傚倷鑳堕幊鎾诲触鐎n剙鍨濋幖娣妼绾惧ジ鏌ㄩ悤鍌涘 闂傚倷绀侀崥瀣i幒鎾变粓闁归棿绀侀崙鐘绘煥閻曞倹瀚�
当前位置: 首页 > 期刊 > 《中国美容医学》 > 2010年第9期 > 正文
编号:11975602
siRNA c-Met腺病毒转染对人外泌汗腺上皮细胞增殖的影响(2)
http://www.100md.com 2010年9月1日 雷 霞 刘 渤 伍津津 鲁元刚 杨亚东


第1页

    参见附件(1496KB,3页)。

     1.2.3 SiRNA met腺病毒转染hESGc细胞:第1代的hESGc细胞接种于6孔板,KSFM培养,细胞的密度约60%~80%时,测定hESGc细胞的最适感染复数,每孔分别加入AdR-siRNA c-Met 0μl、2μl、4μl、8μl、16μl、48h后,在荧光显微镜下观察,统计表达RFP的细胞百分比(感染效率),取感染效率80%以上,同时细胞没有明显由病毒本身引起的细胞毒现象的病毒量,最终确定为4μl AdR-siRNA c-Met病毒液/孔。同理对照组Ad-RFP合适的病毒量亦为4μl Ad-RFP病毒液/孔。由于培养hESGc细胞时,6孔板每孔中培养基约1ml,故适合用于转染的病毒浓度为4μl病毒原液/ml培养基。

    1.2.4 Westernblot检测: 培养14h后,细胞用PBS洗两遍后,加入新鲜的KSFM培养基,转染后48h,取细胞做westernblot检验,明确AdR-siRNA c-Met的有效性。设置对照组(无影响因素),阳性对照组(Ad-RFP转染)和实验组(AdR-siRNA c-Met转染),在转染后48h收集各组细胞,加入RIPA细胞裂解液,超声破碎细胞,提取各组细胞总蛋白并采用BCA定量,取等量总蛋白(40μg)上样,电泳,电转, 5%脱脂牛奶封闭3h, 加一抗(兔抗c-Met多克隆抗体,小鼠抗β-actin 抗体),室温孵育2h,洗膜,加二抗(抗兔IgG-HRP,抗小鼠IgG-HRP),室温孵育1h,洗膜,化学发光法检测,曝光,显影,定影,记录实验结果,Western blot 法测得所有数据均采用UVP BioImaging Systems 采集,将X 线片扫描后的图像数据输入LabWork 3.0 软件进行图像分析,将内参β-actin 作为标准积分吸光度(standard integral absorbance,SIA),各目的条带相对积分吸光度值(relativeintegral absorbance,RIA)=样本积分吸光度值(integral absorbance,IA)/ SIA。

    1.2.5 MTT法检测细胞增殖: 实验分成4组,空白组,对照组,阳性对照组和实验组。空白组不含细胞,仅于96孔板加入200μl KSFM,对照组,阳性对照组和实验组均于96孔板按 2×103个/孔接种hESGc,对照组每孔加入200μl KSFM,阳性对照组每孔加入含4μl /mL Ad-RFP 腺病毒的KSFM 200?l,实验组每孔加入含4μl /ml AdR-siRNA c-Met 的KSFM 200μl 。每一组每一时相点设六复孔。各组在0天,2天,4天时采用MTT法检测细胞增殖情况。从孵箱中取出待测96 孔板,每孔加入MTT 溶液(5g/L)20μl,继续培养4h,弃上清,每孔加入DMSO 100μl,振荡10min,在Bio-Tek 多功能读板机570 nm 波长测定吸光度(A)值,并计算细胞增殖抑制率。细胞增殖抑制率=(阳性对照组A 值-实验组A 值)/ 阳性对照组A值×100%。

    1.2.6 统计学方法:采用SPSS11.0 统计软件包进行分析。数据以均数±标准差表示,组间比较采用方差分析,两两比较采用SNK,P值<0.05 为有统计学意义。

    2结果

    2.1 SiRNA c-Met重组腺病毒转染hESGc:所构建的pSES-HUS-siRNA c-Met干扰序列由美国芝加哥大学医学中心测序中心测序,包含目的基因在内的序列正确。hESGc细胞转染了AdR-siRNA c-Met后,荧光显微镜下可见红色荧光蛋白表达(见图1)。

    2.2 Westernblot检测:hESGc细胞转染AdR-siRNA c-Met后48h,收集细胞进行westernblot检测,结果发现,AdR-siRNA c-Met转染能抑制hESGc细胞中c-Met蛋白的表达(见图2),通过UVP BioImaging Systems 采集图像后分析发现,对细胞中c-Met蛋白的抑制能达到70%以上。

    2.3 MTT 法检测细胞活力:在加入腺病毒转染之前,各组间A 值比较差异无统计学意义(P>0.05)。腺病毒转染hESGc后,2天,4天均能抑制细胞的增殖,实验组A值与阳性对照组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),抑制率分别为16.8%(2天)和34.5%(4天),但对照组与阳性对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

    3讨论

    HGF是一个多效应生长因子,具有多种生物活性,参与机体多种器官组织细胞生长、再生和重塑,研究表明,HGF对多种细胞均有促进增殖和运动的作用,如BMSCs、平滑肌细胞、牙髓细胞、肾小管上皮细胞、角膜上皮细胞以及视网膜上皮细胞等[6-8]。c-Met是HGF特异性受体,其在组织中广泛存在,但是上皮细胞中表达浓度最高[9]。HGF与c-Met结合后,可诱导其发生构像变化,激活受体胞内蛋白激酶结构域中的蛋白酪氨酸激酶(PTK) ,使受体自身的酪氨酸残基磷酸化而激活受体[10]。除自身磷酸化外,c-Met 蛋白的酪氨酸激酶活性可导致多种底物蛋白的酪氨酸磷酸化,经瀑布式磷酸化反应,将信号逐级放大,最终转入细胞核内的转录机构,导致细胞的增殖、分化[11]。

    汗腺起着排汗,调节体温,物质交换等重要作用,深入研究汗腺细胞的生物学行为的影响因素,对揭示汗腺及其他管状系统的发育和功能有着重要的意义,我们既往的研究表明[12],hESGc上有HGF特异性受体c-Met表达,含40~80ng/ml的HGF的培养基能明显促进hESGc的增殖,20~40ng/ml HGF可促进hESGc细胞移行(P<0 ......

您现在查看是摘要介绍页,详见PDF附件(1496KB,3页)
濠电姷鏁告慨鐑姐€傛禒瀣劦妞ゆ巻鍋撻柛鐔锋健閸┾偓妞ゆ巻鍋撶紓宥咃躬楠炲啫螣鐠囪尙绐為梺褰掑亰閸撴盯鎮惧ú顏呪拺闂傚牊鑳嗚ぐ鎺戠?闁哄被鍎抽崣鏇熴亜閹哄棗浜鹃梻鍥ь樀閺屻劌鈹戦崱娆忣杸缂佺虎鍘奸悥濂稿蓟閳╁啯濯撮梻鍫熺▓閸嬫挸鈹戠€n剙绁﹂悗骞垮劚濞茬娀宕戦幘缁樻櫜閹肩补鈧尙鍑圭紓鍌欓檷閸斿秴顫濋妸褎顫曢柟鐑樺灍濡插牊鎱ㄥΔ鈧Λ娆愭櫏缂傚倸鍊峰鎺旀閵堝棔绻嗛柛銉墮缁犵喖鏌熺紒銏犳灈闂佸崬娲弻锝夊棘閸噮妫屽┑鈥虫▕閸ㄨ泛顫忓ú顏勪紶闁告洦鍋呭▓鑸电節濞堝灝鏋ら柡浣呵归埥澶愭偨缁嬪潡鍞堕梺鍝勬川閸嬬娀骞楅弴銏♀拺闂傚牊鍐荤槐锟犳煕閺囥劌骞橀柡鍡╁灦濮婄粯鎷呴悜妯烘畬闂佸鏉垮闁诡啫鍥х睄闁稿本绮庨悾鍫曟⒑閸涘﹣绶遍柛鐘愁殕閹便劌饪伴崼鐔哄弮濠碘槅鍨拃锕€危閸濄儮鍋撳▓鍨灈婵炵》绻濆濠氭晸閻樿尙锛滃┑顔斤供閸橀箖濡堕銈囩=濞达絼绮欓崫铏圭磼鐠囪尙澧曢柣锝囧厴閺佹劖寰勫Ο缁樻珫婵犵數濞€濞佳兾涘Δ鍛祦閻庯綆鍠楅埛鎴︽煕濠靛棗顏╂い蹇旀尦閺屾盯濡歌閺嗩剟鏌ㄥ┑鍫濅槐闁轰礁鍟村畷鎺戭潩妲屾牕鏅e┑鐘垫暩婵挳鏁冮妶澶婄疇閹兼番鍔岀壕鑽も偓骞垮劚濞茬娀宕戦幘鏂ユ灁闁割煈鍠楅悘宥呪攽閻愭彃绾ч柨鏇樺灲閻涱噣寮介鐐茬獩婵犵數濮撮崐鑽ょ玻閻愮儤鐓涘璺猴功婢ф劙鏌¢崨顔剧煉鐎规洘妞藉畷鎺楁倷鐎电ǹ甯楅梻渚€娼ч¨鈧┑鈥虫喘閹本鎯旈姀銏㈩啎闂佸搫顦伴崹鍫曀夐姀銈嗙厵妞ゆ牗姘ㄦ牎闂佺懓鍢查幊搴ㄦ箒闁诲函缍嗘禍娆愮珶閺囩偐鏀介柣妯垮皺娴犳盯鏌熺粙鍨挃缂侇喖鐗婂鍕箛椤撶偘鍖栭梻浣规偠閸庢椽宕滈敃鈧灋闁硅揪闄勯悡鏇㈡倵閿濆懎顣崇紒澶樺枤閳ь剝顫夊ú姗€鎮疯楠炲繘鎮╃紒妯烘濡炪倖甯婇懗鍓佺矓閾忣偂绻嗛柕鍫濇搐鍟搁梺绋款儑閸嬫稓鍙呭┑鈽嗗灡娴滀粙鍩€椤掍礁娴柟铏矒閹晫鍠婂Ο鑽や簷闂備浇顕ч崙鐣岀礊閸℃稑纾婚柛娑樼摠閸嬪倹绻涢崱妯诲鞍闁绘挾鍠栭弻鏇熺箾閸喖濮庡銈呯箞閸婃繈寮诲鍫闂佸憡鎸诲銊╁礆閹烘挻鍎熼柕濞垮劜閻庮剟姊鸿ぐ鎺擄紵闁绘帪绠撳畷鐢稿炊椤掍胶鍘甸柣搴f暩鏋€涙繂顪冮妶蹇曞埌闁靛牊鎮傚璇差吋婢跺á銊╂煥閺傚灝鈷旈柣锝嗘そ濮婃椽骞栭悙鎻捨╅梺鍛婃⒐閸ㄥ灝鐣疯ぐ鎺戠畾鐟滃宕奸鍫熺厱闁规壋鏅涙俊浠嬫煛鐎n亜鈷旂紒杈ㄦ崌瀹曟帒顫濋浣诡唹闂備焦鎮堕崝灞结缚閳╁啩绻嗛悗娑櫭欢鐐烘煙闁箑澧板ù鐓庮儏閳规垿鎮╃紒妯婚敪濡ゆ浜濋幐鍐茬暦椤栨繄鐤€婵炴垶鐟㈤幏濠氭⒑缁嬭儻顫﹂柛濠冩礋瀵悂寮崼鐔哄帗閻熸粍绮撳畷婊堝Ω閳轰胶顔嗛梺璺ㄥ櫐閹凤拷


闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閸濄儮鍋撳鐓庡籍鐎规洘绻堥獮鎺楀籍閸ヮ灝鈥愁渻閵堝棗绗掗悗姘煎墰閳ь剚鑹鹃ˇ閬嶅焵椤掆偓缁犲秹宕曢柆宥呯疇閹兼惌鐓夌紞鏍煏閸繍妲归柣鎾存礋閺屻劌鈹戦崱妤佹婵犵鈧偨鍋㈤柟顔荤矙椤㈡稑顫濋鐐寸亷闁诲氦顫夊ú妯兼崲閸岀偛鐓″璺猴功閺嗭箓鏌涢妷銏℃珦婵℃煡顥撶槐鎾诲磼濮橆兘鍋撻幖浣哥柈妞ゆ牜鍋涢崹鍌滄喐閻楀牆绗氶柛瀣枑閵囧嫰寮介顫勃闂佺粯甯$粻鏍蓟閺囩喓绠鹃柛顭戝枛婵酣姊虹拠鍙夊攭妞ゆ泦鍡楃倒闂備焦鎮堕崕鑽ゅ緤閼恒儲娅犻柟缁樺础瑜版帗鍋傞幖娣灩濞堟鎮楃憴鍕┛缂傚秳绶氶妴渚€寮崼婵堫槰濡炪倕绻愬ú銊х不閺屻儲鈷掑ù锝堟鐢盯鏌eΔ浣圭闁伙絿鍏橀、妤呭磼濠婂懎顦╅梻浣虹帛閸旓箓宕滃▎鎿冩晪閺夊牄鍔嶉崣蹇旀叏濡も偓濡鏅堕鐐寸厱闁绘ê寮堕崵鍥煛瀹€鈧崰鎾诲焵椤掍胶鈯曞畝锝嗗閺呭爼顢楁担铏圭槇闂侀€炲苯澧柟宄版嚇瀹曠兘顢樺☉娆戜簷闂傚倷绶氶埀顒傚仜閼活垱鏅舵导瀛樼厓鐟滄粓宕滃┑瀣剁稏濠㈣泛饪村ḿ鈺呮煏婵炲灝濡烽柛娆撶畺濮婄粯鎷呴崨濠傛殘闁汇埄鍨辩敮鎺曠亱濠电偞鍨惰彜闁哄妫冮弻鐔衡偓娑欋缚婵″洭鏌$€n偆澧甸柡灞炬礃缁绘盯宕归鐓庮潛闂備礁鎼崐鐢稿磻閹炬枼鏀介柣鎰摠缂嶆垿鏌涘顒夊剶闁硅櫕绻冮妶锝夊礃閵娧呮瀫闂備礁鎲¢崝姗€藟閸℃瑦鍠嗛柛鏇ㄥ墮椤庢挾绱撴担鍦槈妞ゆ垵妫涚槐鐐茬暆閸曨兘鎷洪梻鍌氱墛缁嬫帡鏁嶉弮鍫熺厵闁告垯鍊栫€氾拷
婵犵數濮甸鏍窗濡ゅ啯宕查柟鐗堟緲缁狀垶鏌ㄩ悤鍌涘 pdf闂傚倸鍊烽懗鑸电仚缂備浇顕ч悧鎾崇暦濠靛棭鍚嬪璺猴工閸ゆ垿姊虹捄銊ユ珢闁瑰嚖鎷� 闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹缁嬫5娲偐鐠囪尙锛涢梺鐟板⒔缁垶宕戦敓鐘崇厸闁搞儲婀圭花濂告倵濮樼偓瀚� 5 缂傚倸鍊搁崐椋庣矆娓氣偓钘濆ù鐘差儏閸ㄥ倸霉閸忓吋缍戦柛銊ュ€块獮鏍庨鈧俊浠嬫煛閸滀礁澧撮柡灞剧洴椤㈡洟鏁愰崶鈺冩殼闂佹眹鍩勯崹杈ㄧ箾婵犲洤绠栫憸鐗堝笒缁犳稒銇勯弽鐢电ɑ缂傚秴鐗撳鐑樻姜閹峰苯鍘¢梺绋款儍閸婃洟鎮惧畡鎷旂喖鎼圭憴鍕暦闂備線鈧偛鑻晶顕€鏌嶇拠鑼у┑锛勫厴婵℃悂鏁愰崟顒傛綎闂傚倷绀侀幖顐⒚洪妸鈺佺;闁绘劕鎼壕褰掓煥閻曞倹瀚�婵犵數濮甸鏍闯椤栨粌绶ら柣锝呮湰瀹曟煡鏌熼悧鍫熺凡濡楀懏绻濋姀锝呯厫闁告梹娲熼幆灞轿旀担鍏哥盎闂佸搫绉查崝搴ㄥ箠娴h櫣纾奸柕濠忛檮缁舵煡鎽堕悙鐑樼厸濠㈣泛顑呴婊勩亜閵夛妇鐭岄柟鎻掓憸閺侇噣顢欓挊澶樹紦10濠电姷鏁搁崑鐐哄垂閸洖绠归柍鍝勫€婚々鏌ユ煟閹邦剛浜柛娆撶畺濮婄粯鎷呴崨濠傛殘闁汇埄鍨兼禍顏堢嵁韫囨稒鏅搁柨鐕傛嫹闂傚倸鍊烽悞锔锯偓绗涘懐鐭欓柟娆¤娲、姗€濮€閻橀潧濮︽俊鐐€栫敮鎺楁晝閵壯€鍋撳鐐
    闂傚倸鍊风粈渚€骞栭锕€纾圭紒瀣紩濞差亜惟闁冲搫鍊告禒褔姊虹紒妯虹伇濠殿喓鍊濆畷鎴犫偓锝庡枟閻撴洘銇勯幇鈺佲偓鏇㈠几閹寸姷纾界€广儰绀佹禍楣冩⒒娴g瓔鍤欑紒缁樺浮瀹曟垿鎮㈤悡搴o紱濠碘槅鍨垫竟鍫熸叏閾忣偁浜滈柟鐑樺灥椤忊晠鏌涚仦璇插闁哄矉缍佸顕€宕掑⿰鍐偧闂備礁鎽滈崰搴ㄦ倶濠靛绠掗梻浣瑰缁诲倸螞濞戙垺鍎楅悗锝庡亞缁犻箖鏌i幘铏崳濠⒀勭〒缁辨帡宕掑姣櫻囨煙椤曞懎鏋ら柍褜鍓熷ḿ褔骞楀⿰鍩跺洭顢氶埀顒€顫忓ú顏勭闁兼祴鏅滈懣鍥⒑缁嬪灝顒㈤柣鎾偓宕囨殾闁瑰瓨绻嶉崥瀣煕閵夛絽濡兼い搴㈢洴濮婃椽妫冨☉姘暫闁诲孩鍑归崹宕囧垝閸懇鍋撻敐搴′簼闁告瑥绻戠换婵嬫濞戞﹩浠奸梺閫炲苯澧柣妤冨Т椤曪綁骞栨担鍝ヮ槰闂佸啿鎼崯鐘诲几閺嶎厽鍊垫鐐茬仢閸旀岸鏌熼搹顐㈠鐎殿喗鍎奸妵鎰板箳閹惧厖鍝楁繝娈垮枟宀e潡宕㈣缁傚秴鈹戠€n偆鍘告繛杈剧导鐠€锕傚绩娴煎瓨鐓忛柛銉e妼婵秶鈧鍠楀ḿ娆擄綖濠靛洦缍囨い鎰╁€楅澶嬬節閻㈤潧袨闁搞劌缍婇幃銉╁閵堝懐顦ㄩ梺璇″瀻閸曨剛褰冮梻鍌氬€烽懗鑸电仚缂備胶绮崝妤冨垝閺冨牊鍊婚柦妯侯槸閻庮參姊虹粙璺ㄧ伇闁稿鍋ら崺娑㈠箻缂佹ḿ鍘卞┑鐐村灟閸ㄨ绂嶆导瀛樼厱闁靛牆鍟悘鏌ユ煛鐏炶濡奸柍钘夘槸铻i柤娴嬫櫅婵増淇婇悙顏勨偓鏍洪敃鍌氱闁绘梻鍘ч拑鐔兼煕閵夘喖澧婚柡浣革功缁辨挻鎷呴惂闀愮返闂佺ǹ顑冮崝鎴濐潖濞差亝鍋¢柟娈垮枟閹插ジ姊虹紒姗嗘畷缂侇喗鎸搁锝夘敃閿曗偓娴肩娀鏌曟径娑氱暠闁绘繃婢橀埞鎴︽偐缂佹ɑ閿銈嗗灥閸婂灝鐣烽幋锕€绠婚柟棰佺劍閸嶇敻鏌℃径濠勫闁哄懏绋戦锝夊Ω閳哄倵鎷洪梺鑽ゅ枑婢瑰棝骞楅悩缁樼厱闁靛ǹ鍎遍弳杈殰椤忓啫宓嗘鐐差儔閺佸倿鎳為妷锔惧建闂備浇顕х换鎺楀磻閻愬搫纾块柟鎯板Г閸婅泛顭跨捄琛″鐟滅増甯楅崑鎴︽煃瑜滈崜鐔风暦濠婂喚娼╅悹铏瑰劋閻庮剟鎮峰⿰鍛暭閻㈩垱甯炵划鍫ュ幢濡炴洖缍婇幊鏍煛閸曞﹤顦甸弻娑氣偓锝庡亝鐏忣厽銇勯锝囩畺婵炵厧绻橀崺鈩冩媴閸濄儱鎽嬮梻鍌氬€风粈渚€骞夐敓鐘冲殞濡わ絽鍟粈鍕煟閿濆懏婀版い顐f礃缁绘繈妫冨☉娆愭倷濡炪倖娲濇ご鎼佸箞閵娿儙鐔稿緞缁嬫寧鍎撻柣鐔哥矋濠㈡﹢鎯岄崒鐐茶摕婵炴垶顭傞弮鍫濈劦妞ゆ帒瀚悿顕€鏌涜椤ㄥ棝宕曞澶嬬厪闊洤顑呴埀顒佹礈缁寮介鐔哄帾婵犵數鍊崘顭戜紑闂佸搫妫涙慨鐢垫崲濞戞瑦缍囬柛鎾楀惙鎴犵磽娓氬洤鏋涢柣顓炲€块悰顕€寮介澶嬓紓鍌欑閸婂湱鏁Δ鍛畾闁哄啫鐗嗛~鍛存煃閳轰礁鏆欐い蹇斿缁辨捇宕掑顑藉亾閹间礁鐤い鏍仜閸ㄥ倻鎲搁悧鍫濈瑲闁稿鍠愰妵鍕冀椤愵澀绮剁紓浣插亾闁糕剝绋掗悡鐔镐繆椤栨繂浜归悽顖涚洴閺岋絽鈹戦崼婵囩亪闂佸搫鏈ú鐔风暦闁稁鏁囬柣鏂款殠娴硷拷

   闂備浇顕уù鐑藉极婵犳艾纾诲┑鐘叉搐缁愭鏌¢崶鈺佹灁闁崇懓绉撮埞鎴︽偐閸欏鎮欏┑鈽嗗亝閿曘垽寮诲☉銏犖ㄩ柕蹇婂墲閻濇牠鎮峰⿰鍐ㄧ盎闁瑰嚖鎷�  闂傚倸鍊烽懗鑸电仚缂備胶绮〃鍛村煝瀹ュ鍗抽柕蹇曞У閻庮剟姊虹紒妯哄闁稿簺鍊濆畷鏇炵暆閸曨剛鍘介梺閫涘嵆濞佳勬櫠椤斿浜滈幖鎼灡鐎氾拷  闂傚倷娴囧畷鍨叏閺夋嚚娲Χ閸ワ絽浜炬慨妯煎帶閻忥附銇勯姀锛勬噰妤犵偛顑夐弫鍐焵椤掑倻鐭嗛柛鏇ㄥ灡閻撶喐淇婇婵愬殭缂佽尪宕电槐鎾愁吋韫囨柨顏�  闂傚倸鍊烽懗鍫曞箠閹捐瑙﹂悗锝庡墮閸ㄦ繈骞栧ǎ顒€濡肩痪鎯с偢閺屾洘绻涢悙顒佺彅闂佸憡顨嗘繛濠囧蓟閳╁啫绶為悗锝庝簽閸旂ǹ鈹戦埥鍡楃伈闁瑰嚖鎷�   闂傚倸鍊峰ù鍥綖婢跺顩插ù鐘差儏缁€澶屸偓鍏夊亾闁告洦鍓欐禒閬嶆⒑闂堟丹娑㈠川椤栥倗搴婂┑鐘垫暩閸嬫稑螞濞嗘挸绀夐柡宥庡亞娑撳秵绻涢崱妯诲鞍闁绘挻娲樼换娑㈠幢濡吋鍣柣搴㈢啲閹凤拷   闂傚倸鍊风粈渚€骞夐垾鎰佹綎缂備焦蓱閸欏繘鏌熺紒銏犳灈闁活厽顨婇弻娑㈠焺閸愵亖妲堢紓鍌欒閺呯娀寮婚悢纰辨晬婵犲﹤鍠氶弳顓烆渻閵堝啫鍔甸柟鍑ゆ嫹