三种人工合成寡核苷酸序列对体外培养的毛囊黑素细胞的影响(2)
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2.2Masson Fontana银染： CpG1668、CpG1826、CpG2006、NON-CpG和α-MSH干预 72h后，毛囊黑素细胞形态发生变化。CpG1668组，细胞形态较原始，树突呈两极，三级树突较少(图2A)。CpG1826和CpG2006组，细胞形态变化明显，胞体增大，树突增多、延长，还可见二级，三级甚至四级树突(图2B 和2C)。α-MSH组可见细胞形态明显变化，胞体明显增大，树突呈多极，树突数目明显增多、延长(图2D)。NON-CpG组及空白对照未用药组细胞多为 2个树突，三级树突较少(图2E和2F)。
2.4 对酪氨酸酶活性的影响：药物干预毛囊黑素细胞72h后测其 OD值显示，CpG2006组、CpG1826组、CpG1668和α-MSH组均显著促进细胞酪氨酸酶活性(P<0.05)，Non-CpG组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)(表1)。
3讨论
研究表明在紫外线辐射、炎症反应的影响下，表皮中的细胞通过自分泌、旁分泌网络调节皮肤色素沉着[5]。在白癜风皮损区域，应用一些刺激性药物作用于皮损，结果发现在炎症反应后的毛囊口附近出现复色区[6]。
研究证明刺激人细胞最佳 CpG基序是5＇-GTC GTT-3＇，而小鼠的CpG基序是5＇- GACGTT - 3＇[7]。因此，我们利用人工合成含5＇-GAC GTT-3＇的 CpG1826、含 5′- GTC GTT- 3′的CPG2006以及含5＇- GAC GCT- 3＇的CpG-ODN 1668作为炎症介质进行刺激，观察其对毛囊黑素细胞的酪氨酸酶活性及形态的影响。
结果显示药物干预 72h后，各组黑素细胞形态有显著变化。CPG1668组，黑素细胞形态较原始，树突无明显分化，多呈两极，无三级树突。CPG1826和CPG2006组，细胞形态变化比较明显，树突增多、延长，还可见二级，三级甚至四级树突。α-MSH组可见细胞形态明显变化，呈多极，树突数目明显增多、延长。Non-CpG组及空白对照组细胞多为 2个树突，细胞形态较原始。CPG1826和CPG2006组能明显刺激人黑素细胞的树突成长与分化成熟，并且随作用时间的延长而增强，这也就进一步说明刺激人DC的最佳 CpG基序是5＇-GTC GTT-3＇，这段CpG基序同样对黑素细胞形态的作用也最强。CPG1668组对黑素细胞的树突作用不明显，说明这段基序对人黑素细胞树突的成熟分化作用较差。另外，药物干预黑素细胞72h后测其OD值显示，CpG2006、CpG1826、CpG1668对细胞酪氨酸酶具有显著的促进作用(P<0.05)。CpG1826和CpG2006不但能刺激人黑素细胞的树突生长而且能促进黑素细胞酪氨酸酶活性；然而CPG1668处理组对黑素细胞酪氨酸酶活性有促进作用但对黑素细胞的树突生长作用较小，这种结果可能与它们具有不同的基序结构有关。当把CPG1668 中的“C”换成CPG1826与CPG2006中的“T”能明显刺激人黑素细胞的树突生长，也能增加黑素细胞酪氨酸酶活性。而把CPG1826和CPG2006中的"T"换成CPG1668 中的“C”时，只能刺激黑素细胞的树突生长，不能刺激黑素细胞酪氨酸酶活性增加。我们目前的研究还不能解释这种现象，这有待进一步研究其作用机制。
综上所述，不同的CpG基序对人黑素细胞的影响不同，CpG2006，CPG1826可促进毛囊黑素细胞的酪氨酸酶活性和树突增加，部分解释了在白癜风皮损区炎症反应后毛囊口复色的原因，这为研究将CpG-ODN 临床应用到白癜风、皮肤色素沉着等色素障碍性疾病的治疗奠定了基础。但是，如何设计活性更高，对黑素细胞作用更强等问题尚需进一步研究。
[参考文献]
[1]Blanpain C, Sotiropoulou PA. A dominant role of the hair follicle stem cell niche in regulating melanocyte stemness[J]. Cell Stem Cell, 2010, 6(2):95-96.
[2]Carlie G, Ntusi NB, Hulley PA,et al. KUVA(khellin plus ultraviolet A)stimulates proliferation and melanogenesis in normal human melanocytes and melanoma cells in vitro[J]. Br J Dermatol,2003,149(4):707-177.
[3]Garcin G, Le Gallic L, Stoebner PE, et al ......
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