人表皮干细胞改良培养及其组织工程皮肤的构建(3)
 |
| 第1页 |
参见附件(2390KB，4页)。
将同一块包皮组织等份分开，用两种方法同时分离hESCs，台盼蓝染色结果表明：改良法的活细胞率明显大于传统法细胞，从形态上观察，细胞展开生长无差异。我们用两种方法培养的原代细胞绘制细胞生长曲线(图3)，可以看出改良法细胞存活数量多，增殖速度快，细胞活性好，证明了改良法培养可以快速获得大量hESCs。研究表明，K19表达阳性的细胞多分布在毛囊隆突部和基底膜，且具有干细胞的慢周期性和强大的增殖特性，而终末分化的表皮细胞则表达K10。所以K19也被认为是表皮干细胞的特异性标志[9]。β1整合素不仅介导表皮干细胞与细胞外基质的黏附，也调控终末分化启动，β1整合素表达的降低会刺激表皮干细胞离开干细胞池，向上迁移成为终末分化细胞，因而认为β1整合素高表达可以是表皮干细胞的标志物之一[10-11]。我们将应用Ⅳ胶原快速贴壁的改良法细胞通过细胞免疫化学方法研究，显示改良法细胞K19、β1整合素呈阳性表达，证实了采用改良方法培养的细胞为hESCs。进一步分别采用两组细胞为种子细胞，鼠尾胶原为支架构建组织工程皮肤，组织切片HE染色显示改良组hESCs细胞构建的组织工程皮肤表皮层较厚，细胞复层多，表皮细胞复层层数为5～6层、基底细胞排列整齐，而传统组hESCs构建的组织工程皮肤表皮细胞复层层数为3-4层、基底细胞排列散乱，表明应用改良组细胞更适宜构建组织工程皮肤(图5)。
表皮干细胞是一种在成年期还能维持较高的自我更新能力的细胞群，在正常状态下维持表皮的自我更新，当受到损伤刺激时，表皮干细胞可以参与皮肤损伤的修复[12]，本研究采用改良法分离培hESCs并与传统方法对比，显示出改良方法培养出的hESCs活力和增值能力更好，构建的组织工程皮肤具有更好的形态结构，为以表皮干细胞为种子细胞构建组织工程皮肤进一步奠定了基础。
[参考文献]
[1]谢晓繁,贾赤宇,付小兵,等.成体表皮干细胞的分离培养与鉴定[J].中国危重病急救医学, 2006,18(1):46-48.
[2]李富,付小兵,刘文忠.人表皮干细胞分离培养和纯化鉴定的进展[J].感染、炎症、修复,2008,9(4):240-242.
[3]谢举临,利天增,祈少海,等.体外培养表皮干细胞构建组织工程皮肤的研究[J].中华实验外科杂志,2006,23(12):1533-1535.
[4]杨斌,洪清琦,徐令,等.表皮干细胞的快速高效分离[J].组织工程与重建外科杂志,2005,1(5):268-271.
[5]Cotsarelis G, Kaur P, Dhouailly D, et al. Epithelial stem cell in the skin: definition, markers, localization and functions[J]. Exp Dermatol,1999, 8(1):80-88.
[6]司徒镇强,吴军正. 细胞培养[M].西安:世界图书出版社,2004:66-67.
[7]Reddy NM, Lange CS. Serum, trypsin, and cell shape but not cell-to-cell contact influence the X-ray sensitivity of Chinese hamster V79 cells in monolayers and in spheroids[J]. Radiat Res,1991,127(1):30-35.
[8]李丹,李世荣,曹川.人表皮干细胞的体外分离培养和鉴定[J].中国美容医学,2007,16(10):1343-1346.
[9]LI J,Miao C,Guo W,et al. Enrichment of putative human epidermal stem cells based on cell size and collagen type IV adhesiveness[J] ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(2390KB，4页)。