增强型绿色荧光蛋白基因转染小鼠骨髓间充质干细胞的研究(1)
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[摘要]目的：以重组腺病毒(Ad)为载体，将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染至小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs)中，为MSCs体内示踪提供实验基础。方法：用全骨髓细胞贴壁法分离纯化小鼠MSCs并体外扩增、鉴定，以重组绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-EGFP)转染，并用荧光显微镜和流式细胞仪检测转染率，CCK-8法检测转染细胞的增殖活性。结果：转染后10h MSCs开始表达荧光，6～8天达高峰，转染率可达92.3%，28天仍有表达；转染细胞的增殖活性和未转染细胞无统计学差异。结论：Ad-EGFP能高效、安全的转染mMSCs。
[关键词]骨髓间充质干细胞；增强型绿色荧光蛋白；重组腺病毒；基因转染
[中图分类号]R394.2[文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2011)02-0257-04
Study on the transfection of enhanced green fluorescent protein gene into murine marrow mesenchymal stem cells
NING Chang,HU Kai-xun,YU Chang-lin
(Department of Heamatologe,Affiliated Hospital of Academy of Military Medical Science,Beijing 100071,China)
Abstract:ObjectiveTo found the experimental basis of MSCs tracer in vivo,with enhanced green fluorescent protein gene (EGFP)mediated by recombinant adenovirus(Ad) vector transfected murine bone marrow mesenchymal stem cells(mMSCs).MethodsThe mMSCs were separated and enriched by using bone marrow adherent culture and identificated in vitro, to observe the efficiency of transfection of Ad-EGFP by fluorescence microscope and flow cytometry, CCK-8 applied to assay cell proliferation activity.Results10h after transfection MSCs began to express fluorescent, 6 to 8 days reached the peak infection rate of 92.3%, 28 days still expression.Proliferation of transfected cells and untransfected cells no significant difference. Conclusion Ad-EGFP can transfect mMSCs effectively and safly.
Key words:bone marrow mesenchymal stem cells;enhanced green fluorescent protein gene; recombinant adenovirus;gene transfection
骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymcal stem cells，BMSCs)是骨髓基质细胞，因具有较强的增殖及多向分化潜能[1]，成为细胞移植的理想种子细胞，又因其免疫原性低，在多种疾病的治疗中起着重要的作用，在美容医学方面有一定的应用前景。但其在体内的迁徙、定植、增殖过程尚不十分明了，因此有效的分子标记对其体内外示踪有重要的意义。增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)是一种新型的报告基因，具有荧光稳定、无毒、使用方便等特性，可对活细胞实时定位观察。本实验以腺病毒为载体，介导EGFP转染小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs)，现将实验结果报道如下。
1材料和方法
1.1 材料：LG-DMEM培养基(Gibco公司)，DMEM培养基(Hyclone公司)，胎牛血清FBS(Hyclone公司)，1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(Sigma公司)，FITC标记兔抗鼠CD34、CD45、CD105、CD44(BD公司)，0.25%胰蛋白酶(Sigma公司)，Cell Count Kit-8(CCK-8)试剂盒(Dojindo公司)，X90-3洁净工作台(北京半导体设备厂) ......
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