中波紫外线对HaCaT细胞增殖活性的影响(1)
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[摘要]目的：探讨中波紫外线(UVB)对HaCaT细胞损伤的影响。方法：取对数生长期的HaCaT细胞，用0、30、60、90 mJ/cm2剂量的UVB照射后继续培养0、24、48、72h，在倒置显微镜下观察其形态学变化，用MTT法检测UVB照射对细胞增殖活性的影响。结果：在30～60mJ/cm2的UVB辐射下，随辐射剂量的增大，细胞的增值活性逐渐下降，而细胞的凋亡率逐渐增加，倒置相差显微镜从形态学上证实了细胞的凋亡改变。结论：UVB可诱导细胞凋亡，且呈剂量依赖性。
[关键词]中波紫外线；辐射；HaCaT细胞；损伤
[中图分类号]Q813.1[文献标识码]A[文章编号]1008-6455(2011)03-0419-03
Effect of HaCaT cells proliferation by Ultraviolet-B Radiation
CHEN Chen1，SHI Yu-jie2，JIANG Zhen-you1, YANG Jian2
(1.School of Medicine, Jinan University, Guangzhou 510632,Guangdong,China; 2.Department of Dermatology, th e Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University, Guangzhou 510260, China)
Abstract:ObjectiveTo investigate the effect of damadge on HaCaT cells irradiated by Ultraviolet-B Radiation (UVB)(0、30、60、90mJ/cm2). MethodsThe dose- and time- dependent photodamage was observed by light microscopy. MTT assay was used to record cellular activity.Results The irradiation damage of HaCaT cells was dependent on the irradiated dosages (0、 30、60、90mJ/cm2). Conclusion UVB can induce damadge of HaCaT cells.
Key words: UVB; irradiation; HaCaT cells; damadge
皮肤是日光辐射直接作用的靶器官，紫外光按照波长的长短分为UVC(200～280nm)、UVB(280～315nm)、UVA(315～400nm)，其中UVB是紫外光最少的一部分，虽然紫外光对人体是有益的，但大量的紫外光辐射，尤其是UVB，会对人体健康造成威胁[1]。笔者采用不同剂量的UVB对HaCaT细胞进行辐射，以MTT法检测UVB照射对细胞增殖活性的影响，并在倒置显微镜下观察细胞形态学变化，现报道如下。
1材料和方法
1.1 材料
1.1.1人角质形成细胞(HaCaT细胞)购自中国典藏培养物保藏中心(武汉大学保藏中心)，在DMEM培养基(Gibco，美国)中培养。胰蛋白酶、噻唑蓝(MTT)、二甲亚砜(DMSO)均购自美国Gibco公司，小牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司。
1.1.2主要仪器设备：紫外光源(UVB灯管)为北京电光源研究所产品(功率8W，波长305nm)。UVB紫外线辐照计购自北京师范大学光电仪器厂。流式细胞仪为美国Becton Dickinson公司产品。紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，倒置相差显微镜(Olympus，日本)，CO2培养箱(Napco 5400，日本)。
1.2实验方法
1.2.1细胞培养、分组和照光处理：取HaCaT细胞培养于含有体积分数10%小牛血清的DMEM培养基中，于37℃、95%湿度及体积分数5% CO2条件下培养、传代。取对数生长期的HaCaT细胞，经0.5%胰蛋白酶+0.03%EDTA消化后用含10%小牛血清的DMEM培养基以1×105个/ml细胞密度接种于96孔培养板中，当细胞融合80%以上且处于对数生长期，吸去各组培养细胞培养液，用PBS冲洗一次，并加入少量PBS覆盖底面。用铝箔纸做避光处理，解开需要处理的孔，用UVB进行照射，并以UVB辐射度监视器标定照射强度，UVB剂量=UVB辐射度×时间(s)。培养板距灯管15cm，辐射总剂量分别为0、30、60、90mJ/cm2，照射完毕后加入完全培养基继续孵育至0h、24h、48h、72h。
1.2.2 倒置相差显微镜观察细胞形态学变化：以剂量0、30、60、90mJ/cm2UVB辐射细胞，在照射后0h、24h、48h、72h以倒置显微镜观察细胞损伤的形态变化。
1.2.3 MTT法测定HaCaT细胞增殖活性：将100μl密度为1×105 个/ml HaCaT细胞悬液接种于96孔内，经0、30、60、90mJ/cm2照射处理，每组6个复孔，继之更换新鲜培养液，继续培养12h，各孔加入MTT 10μl(浓度为5mg/ml)，再孵育4h后弃去上清液，加入150μl二甲基亚砜(DMSO)，室温振荡15min，于570nm波长测定每组吸光度(A)值，观察各组细胞的增殖活性并绘制细胞生长曲线 ......
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