富含血小板血浆双相接种法构建的组织工程骨修复山羊颅骨缺损(2)
1.2PRP和PPP的制备:配置抗凝剂ACD:0.48g柠檬酸,1.32g柠檬酸钠,1.47g葡萄糖(中国阿拉丁试剂有限公司)溶于100ml双蒸水中,0.45μm过滤消毒,冷藏备用。于一只中国青山羊(5月,10kg)颈静脉抽取全血40ml,其中加入40ml ACD,摇匀,移入50ml离心管,1 000g离心,15min。取上层血浆,弃红细胞,二次离心,3 000g,20min。上层为清亮的PPP,移入另一15ml离心管中备用。中间层为白色的血小板,轻轻用吸管搅动吸出移至另一离心管中,下层红细胞弃之。用少量PPP将血小板重悬,人工血小板计数,调节成浓度为106/μl的PRP备用[17-19]。1.3 PLGA支架预处理:PLGA支架由济南岱罡生物科技有限公司提供。PLA:PGA=75:25。孔径大小100~300μm,空隙率80%。用11号尖刀片将大块PLGA切成直径11mm厚3 mm的圆盘状。使用前,PLGA圆盘浸泡于75%酒精中24h,PBS漂洗3次,DMEM孵育30 min,取出置于无菌纱布上,吸干水分,再滴加细胞悬液,以增加PLGA的亲水性。
1.4 细胞/支架复合体修复山羊颅骨缺损:中国青山羊8只,7~8月,17~20kg。随机分成4组,2只/组。用牙科钻在颅顶部制造2个直径2cm全层颅骨缺损,去除局部骨膜 ......
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