1.2细胞的培养及GFP标记

    1.2.1 Wistar大鼠睾丸间质体细胞的分离及培养：无菌条件下切取3周龄wistar大鼠的睾丸组织，去除白膜，和可见血管，将睾丸组织剪碎，0.3%复合胶原酶NB4与组织量按5:1比例，于37℃恒温摇床内消化至睾丸形状基本消失，曲细精管断裂，加两倍量的PBS稀释。经150目滤网过滤，1 500r/min离心5min，沉淀细胞，37℃、5%CO2、95%O2和100%湿度条件下，无血清DMEM/F12(1:1)培养24h，冲洗去除悬浮细胞，所得全部贴壁细胞即为共培养睾丸体细胞。在倒置显微镜下观察细胞形态与生长情况。待细胞长满培养皿底，即可用0.25%胰蛋白酶消化，注意控制消化时间不超过2min，接着进行传代。

    1.2.2 Wistar大鼠睾丸间质体细胞的GFP转染即慢病毒GFP转染睾丸间质体细胞：将培养的睾丸体细胞以0.25%胰酶蛋白酶-0.02%EDTA消化，制备单细胞悬液。将病毒液小心滴加之细胞上，轻轻混匀。置于37℃，5% CO2、95%O2和100%湿度培养箱中孵育4h，离心，弃去转染液，将细胞按2.5×106的密度进行接种于经0.1%明胶包被的新培养皿内，加2ml加有血清DMEM/F12(1:1)培养基继续培养48～90h。荧光倒置显微镜观察、拍照,常规培养、传代。

    1.3标记后的睾丸间质体细胞回植：将转染标记好的睾丸间质共培养细胞复合于生物材料支架上回植于去势鼠(事先制备并饲养一定周期)体内，进行一定时间的体内培养。

    1.4 雄激素的检测：抽取回植了转染了GFP的睾丸间质体细胞的去势鼠的血液，离心后取用血清，经Access全自动免疫分析系统(RIA ......