多巴染色与光密度法在细胞水平评价原料美白功效的应用研究(1)
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[摘要]目的：在细胞水平评价化妆品原料的美白功效。方法：体外培养小鼠黑素瘤细胞B16，通过多巴特异性染色，利用平均光密度法检测化妆品原料对细胞中黑素生成的抑制作用。结果：多巴对细胞内黑素具有特异性染色，浓度为25μg/ml的曲酸对黑素细胞内黑素生成的抑制率为(48.44±3.44)%，板内标准偏差值仅为7.09%，板间标准偏差值小于7.22%，曲酸、白藜芦醇和绿茶提取物均对细胞内黑素的生成具有较为明显的抑制作用，而桑白皮提取物对细胞内黑素生成几乎没有抑制作用。结论：采用多巴染色和平均光密度的方法检测黑素瘤细胞中黑素含量，精度较高、板间板内误差较小，能够成功用于化妆品原料美白功效的评测。
[关键词]多巴染色；光密度法；黑素生成；小鼠黑素瘤细胞
[中图分类号]Q933-333[文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2011)07-1114-04
Assessment of whitening efficacy of cosmetical materials in B16 melanoma cells
LIU Rong, SUN Jian-ning, GUO Ya-jian
(School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing100102,China)
Abstract: Objective To assess the whitening efficacy of cosmetical materials in B16 melanoma cells. Methods B16 melanoma cells were cultured in vitro, and the inhibition of cosmetical materials on the melanogenesis was measured with L-Dopa dying and mean optical density method. ResultsMelanin could be dyed by L-Dopa specifically in B16 melanoma cells, and the inhibition of Kojic acid with concentration of 25μg/ml on the melanogenesis was (48.44±3.44)%, and the RSD within and between the plate were 7.09% and 7.22%, respectively. Kojic acid, Resveratrol and Camellia sinensis extract could inhibit the melanogenesis effectively, while White mulberry root-bark extract didn't have any inhibition effect on the melanogenesis.ConclusionsThe content of melanin in B16 melanoma cells was measured with L-Dopa dying and mean optical density method, which is proven to be higher sensitivity and lower error，and could be used for the assessment of cosmetical materials on the whitening efficacy successfully.
Key words：L-Dopa dying; optical density; melanogenesis; melanoma cells
随着人们生活品质的日益提高，功能性化妆品如美白类化妆品越来越受到消费者的关注和青睐。对美白类化妆品中有效成分的功效评价方法很多，包括体外酶抑制法[1]、细胞法[2]、豚鼠动物法[3]及人体实验法[4]等。其中，细胞法以其高效率、较低成本、体内高相关度等优点，逐渐成为评价美白成分功效的主要方法。传统的细胞法采用NaOH直接溶解经过超声裂解后的细胞内黑素，通过光度法来检测细胞内黑素含量的变化，这种方法在实际操作过程中，由于黑素本身很难溶解，在溶解过程中必须采用加热超声等助溶手段，此外细胞裂解后产生的不溶性胞体蛋白物质也和黑素在离心过程中一同沉淀，很难分离，这些都对黑素含量的检测产生了很大的影响，导致结果误差较大。为了克服上述缺陷，本文采用多巴染色和光密度相结合的方法来表征细胞内黑素的含量，并利用这一方法对数种中草药的美白功效进行了评价。
1材料和方法
1.1 药品、试剂与仪器： DMEM培养基(Gibco公司)，新生牛血清(Gibco公司)，胰酶(Gibco公司)，L-多巴(Sigma公司)，桑白皮提取物(由杭州迪康生物技术有限公司提供)，绿茶提取物(由天津市尖峰天然产物研究开发有限公司提供)，曲酸(由北京贝丽莱斯公司提供)，白藜芦醇(由常州生物公司提供)，其余试剂均为市售分析纯。酶标仪(Bio-Rad 680，美国伯乐公司)，倒置生物显微镜(XDS型，重庆光电仪器总公司) ......
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