应用PCR技术快速检测口腔念珠菌菌株(1)
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[摘要]目的：本研究将PCR技术应用于口腔念珠菌检测中，寻找出一种能够快速、准确、有效检测口腔念珠菌的方法。方法：收集口腔临床唾液样本100例，科玛嘉显色培养基进行培养，同时应用PCR方法对100例临床样本进行检测鉴定。结果：传统念珠菌培养方法的检出率为35%；应用两对引物，PCR方法的检出率分别为68%和49%。传统的念珠菌检测方法耗时长，特别是培养法，需时48hrs；应用PCR方法对念珠菌进行检测，只需要5hrs，且阳性检出率和准确性较高。结论：PCR方法快速敏感、特异性高，相较于念珠菌传统培养方法，是一种更加简便理想的检测方法。
[关键词]口腔念珠菌；培养；聚合酶链反应
[中图分类号]R783 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2011)09-01439-03
Application of PCR in rapid detection of oral candida
DENG Ni1,CHE Tuan-jie2,LEI Ke3,LIAO Tian-an1,HE Xiang-yi3
(1.Department of Stomatology，Hainan Provincial People's Hospital，Haikou 570311,Hainan,China;2.School of Life Science,Lanzhou University;3.School of Stomatology,Lanzhou University)
Abstract:ObjectiveThis study was performed to through PCR technology to find a rapid, accurate and effective detection that is used to detect oral candida. Methods Collecting 100 specimens of saliva, then culture these on CHROMagar media and detect by PCR. Results The positive rate of oral candida is 35% by traditional cultural detection while by PCR technology in two primers are 68% and 49% respectively. The traditional detections for candida are time-consuming,especially in culture method which consumes 48hrs at least;to apply PCR method to detect candidas only need 5hrs with high positive rate and accuracy. ConclusionTo compare with traditional culture method for Candidas,PCR technology is more perfect and handy.
Key words:candida;culture;PCR
随着各种侵入性诊断治疗手段如手术干预、化疗、放疗或联合治疗等的广泛开展，以及各类免疫抑制制剂和广谱、超广谱抗生素的大量使用，自身免疫低下患者临床上念珠菌感染的发病率明显增高，已成为影响患者健康及威胁患者生命的重要原因。同时，念珠菌感染与很多口腔疾病相关，如口腔念珠菌病，口腔扁平苔藓，口腔白斑等。其中，白色念珠菌作为口腔粘膜多种感染的致病因子的作用及其在白斑向癌转变过程中的促进作用均已得到肯定[1]。因此，快速准确地检测口腔念珠菌，对研究念珠菌对口腔的致病性和预防、监测口腔念珠菌感染都具有十分重要的意义。随着分子生物学技术的飞速发展，聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)逐渐应用于临床病原菌的检测和鉴定。PCR方法快速敏感、特异性高，不仅能检测出活力较高的致病菌，而且能检测出活力较低而难以培养的真菌，为临床检测念珠菌提供了更有效的途径。本研究将PCR技术应用于检测口腔念珠菌中，寻找出一种能够快速、准确、有效检测口腔念珠菌的方法。
1材料和方法
1.1 菌种和试剂
1.1.1菌种：于兰州大学口腔医院采集100 例口腔唾液样本。
1.1.2试剂和仪器：试剂： TE-TritonX-100裂解液， PCR试剂 (Taq酶、10×buffer、dNTP混合物、引物)，科玛嘉念珠菌显色培养基(科玛嘉公司，法国)。主要仪器：PCR仪(MG-96+杭州朗基科学仪器有限公司)，电泳仪(DYY-8c型，北京市六一仪器厂)，电子恒温培养箱(DNP-9162上海精宏) ......
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