清斑胶囊对ICR鼠皮肤色素生成及抗氧化作用的实验研究(2)
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2.6酪氨酸酶活性测定方法：采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法检测酪氨酸酶活性。反应混合物2ml：0.1mol·L-1、pH6.5 、PBS 1.9ml+药物0.1ml(质量浓度0.1g·ml-1)。37℃孵育10min，加0.15% DL-多巴1ml，充分反应后，用分光光度计测定吸光度(A475)值。以PBS液为空白，不加药物的反应组为对照，实验每一浓度设3个复管，实验重复3次，取平均值，分别测定酪氨酸酶活性。
2.7统计学处理：统计结果以x±s表示，用SPSS13.0统计学软件进行分析，数据两两比较采用t检验，多组之间比较用ANOVA进行。
3结果
3.1 清斑胶囊对黄体酮诱导的皮肤色素沉着模型小鼠血清和肝脏中SOD、MDA、GSH含量的影响：小鼠模型组血清中SOD、GSH活性明显降低、MDA增加，低、中、高三个剂量组分别给药后，与模型对照组相比，给药组均表现出明显改善作用，其中中、高剂量组与模型组比较差异显著(P<0.05)，且具有剂量依赖效应(见表1)，同时清斑胶囊可以明显升高小鼠肝脏的SOD，降低MDA水平，具有显著性差异(见表2)。
3.2 清斑胶囊对皮肤色素沉着模型小鼠皮肤黑色素的影响：正常对照组表皮中未见黑素细胞表达，毛囊及皮脂腺基底细胞中可见少量黑素细胞，且着色较浅，呈现浅黄色。模型组黑素细胞阳性表达明显增多，分布于毛囊基底细胞中，着色较深，染色成黄褐色。清斑胶囊高、中、低剂量组可以明显减少黑素细胞的表达(见图1)。
3.3清斑胶囊对酪氨酸酶活性的影响：不同浓度清斑胶囊对酪氨酸酶活性有显著抑制作用，各浓度之间又以高浓度的作用最强，与模型组比较差异显著。以上说明清斑胶囊良好的治疗作用与其对酪氨酸酶的抑制作用相关，且存在量效关系(见表3)。
4讨论
黄褐斑形成机理极为复杂，影响因素很多，黑素产生过多沉积于皮肤是其结果，且多发于中青年女性面部皮肤[4-5]。文献报道随年龄增长，机体内抗氧化能力下降，自由基水平增加[6]，成为导致黄褐斑的主要原因之一；近年来有研究表明，酪氨酸酶在黄褐斑的发生、发展过程中同样起着重要作用，决定皮肤颜色的色素主要为黑色素，黑色素产生于表皮基底层的黑色素细胞内，由酪氨酸经含铜的酪氨酸酶的羟基化作用后形成多巴，再经氧化而形成[7]，抑制酪氨酸酶活性可以改善黄褐斑的形成。
目前治疗黄褐斑主要从抑制黑素细胞活性及增殖、防止黑素形成及抗氧化等方面入手，同时尽量避免和减少诱因[8]。中药治疗黄褐斑的作用是多靶点的，而黄褐斑上午发病也涉及多因素、多环节，可见中医药治疗该病具有广阔的研究前景[9]。同时中西医药物结合治疗黄褐斑亦逐年增多，临床多用以中医为主的中西医结合疗法[10]。
本复方从中西医两种理论角度出发，选取大豆异黄酮、白芷、VC、VE、当归、川芎组合而成，结果显示该复方能明显提高小鼠黄褐斑模型血清和肝脏中SOD、GSH的活性，降低MDA含量。同时明显降低黑素细胞的表达以及能在体外显著抑制酪氨酸酶活性。
综上研究表明，本复方具有良好的治疗黄褐斑功效，其治疗黄褐斑的机制可能与提高机体抗氧化能力以及抑制酪氨酸酶活性，进而阻断了黑素的形成有关。
[参考文献]
[1]邹宏超,付香莲.黄褐斑病因及发病机制研究进展[J].皮肤病与性病,2010,32(4):27-29.
[2]孙静.中医药辨证施治在美容中的作用[J].中国美容医学,2011,20(3):483.
[3]过伟峰,徐 立,项晓人,等.建立小鼠黄褐斑实验动物模型的初步研究[J].中国中医基础医学杂志,2001,7(2):49-51.
[4]余穗娟,刘永年,金久宁,等.祛斑系列治疗黄褐斑31例临床验证报告[J].中国美容医学,2001,10(5):387-389.
[5]王芳. 黄褐斑的治疗进展[J].中国美容医学,2011,20(2):335-337.
[6]金道山,梅世昌,江朝光,等.保元丹对老年雄性大鼠血清自由基水平的影响[J] ......
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