核因子κB在烧伤血清诱导血管内皮细胞损伤中的作用(1)
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[摘要]目的：探讨核因子κB在烧伤血清诱导血管内皮细胞损伤中的作用。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，随机分为空白对照组、20%(V/V)人烧伤血清刺激组、PDTC预处理组, 1h后采用MTT及流式细胞仪观察HUVECs损伤情况，蛋白印迹法检测HUVECs胞核NF-κB-p65的蛋白表达变化。结果：与空白对照组比较，烧伤血清诱导了HUVECs损伤和凋亡，胞核NF-κB-p65蛋白表达增多。相对于烧伤血清刺激组，PDTC预处理组HUVECs损伤减轻，细胞凋亡显著减少。结论：核因子κB参与烧伤血清致内皮细胞损伤, 阻断核因子κB可能对防治严重烧伤所致的内皮细胞损伤具有一定潜在价值。
[关键词]烧伤；内皮细胞；核因子κB
[中图分类号]R644 Q813.1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2012)01-0066-02
NF-κB imvolved in the process of vascular endothelial cells damage caused by burn sera
YANG Xi-ming,LI Ming
(Department of Burn,Affiliated Hospital,Yan'an University,Yan'an 716000, Shaanxi,China)
Abstract: Objective To explore the role of NF-κB in the vascular endothelial cells damage by burn sera. Methods Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were cultured in vitro and randomly divided into 3 groups: 5% fetal bovine serum group; 20% burn human serum group and pretreated with PDTC group. The injury and apoptosis of HUVECs were observed after 1 hours by MTT and flow cytometry. Meanwhile, the content of NF-κB-p65 in the nucleus were detected by wester blotting. Results Compared with the 5% fetal bovine serum group, burn serum could induce the injury and apoptosi of HUVECs, up-regulate the protein expressions of NF-κB-p65 in the nucleus. Compared with the 20% burn human serum group, the injury and apoptosis of HUVECs was significantly improved in pretreated with PDTC group. Conclusions NF-κB is involved in the procedure of HUVECs damage caused by burn serum. It may benefit the HUVECs by blocking NF-κB in severe burn patients.
Key words:burn;endothelial cell;NF-κB
严重烧伤早期血管内皮细胞损伤，不仅造成血管内皮结构的损害，还严重消弱了内皮细胞在调节血管张力、抑制血小板黏附和聚集、抑制血管平滑肌增殖、维持机体凝血纤溶系统平衡及维持血管通透性等方面发挥的重要作用，从而成为烧伤早期休克发生和多脏器受累的基础[1]。核因子κB广泛参与多种细胞的生理、病理过程, 许多研究提示核因子κB参与多种心血管事件[2]，因此深入探讨核因子κB在烧伤血清诱导血管内皮细胞损伤中的作用对于研究烧伤早期抗休克及多脏器保护具有重要意义。
1 材料和方法
1.1材料：胰岛素(丹麦 Novo Nordisk公司)；内皮细胞专用培养基(美国 Sciencell公司)；NF-κB-p65(美国 Cell Signaling公司)； 兔抗人Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的二抗(北京 中衫金桥公司)；核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒(南京 凯基公司)；NF-κB特异抑制剂 PDTC(美国 Sigma公司)；Western-Blot系统(美国 Bio-Rad公司)；ChemiDoc XRS凝胶成像分析系统(美国 Bio-Rad公司)。
1.2细胞培养及实验分组 ......
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