VEGF在不同皮肤扩张方式中表达的意义(1)
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[摘要]目的：探讨VEGF在不同皮肤扩张方式中的表达与扩张皮瓣中新生血管的形成关系，建立适合于临床的最佳的皮肤扩张方式。方法：选用62只新西兰大白兔随机分为5大组，随机将动物按不同扩张方式分为5组：A组(反复快速扩张组)、B组(快速扩张组)、C组(常规扩张组)、D组(植入不扩组)、E组(正常对照组)，采用免疫组织化学染色观察扩张皮瓣中VEGF的表达情况。结果：在维持1周，A组的VEGF表达明显高于B组和C组(P<0.05)，B组与C组差异不明显(P>0.05)；在维持2、3、4周A组与B组、C组比较均无显著性差异(P>0.05)；在维持6周，A组的VEGF表达与B组比较无显著性差异(P>0.05)；维持6周的A组和B组的VEGF表达明显高于维持4周的C组(P<0.05)。结论：反复快速皮肤扩张可明显提高扩张皮瓣中VEGF的合成与分泌，促进血管形成。
[关键词]皮肤扩张术；血管生成；血管内皮生长因子(VEGF)
[中图分类号]R622 R332 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2012)10-0-0
目前皮肤软组织扩张术已广泛应用于整形外科中[1-6]，成为整形外科的重要治疗手段和常用的基本技术。临床上应用最多的扩张方式为常规扩张方式。但此法疗程较长、并发症多[7-12]。国内外学者对此发展了各种快速扩张方式[13-16]，这些方法均不同程度上缩短了疗程，但可能导致组织坏死，还存在诸如回缩率较高、操作繁琐、设备昂贵等弊端。近年微创技术的出现有效减少了并发症[17]。本研究结合目前临床常用的常规扩张法与快速扩张法的特点，拟采用一种新型的皮肤软组织扩张方式-反复快速皮肤扩张，通过对新西兰大白兔皮肤扩张，应用免疫组织化学的方法，观察反复快速皮肤扩张对皮瓣血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表达的影响，并探讨建立更适应于临床的皮肤扩张方式提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物：62只雄性新西兰大白兔，6月龄，体重2～3kg，由河北医科大学动物实验中心提供，冀医动管字610063号。动物分笼饲养，统一饲料，自由饮食。
1.2 动物分组：随机将动物按不同扩张方式分为5组：A组(反复快速扩张组)、B组(快速扩张组)、C组(常规扩张组)、D组(植入不扩组)、E组(正常对照组)，A、B组每组20只动物，C组16只动物，D组5只动物，E组1只动物。
1.3 皮肤扩张动物模型制备：手术区备皮，术前称量体重，2.5g/L戊巴比妥钠(25mg/Kg)于耳缘静脉注射行全身麻醉。麻醉显效后，常规消毒手术区、铺无菌巾。自两耳根后缘连线间，横行切开长约2.5cm皮肤切口，切开皮肤及皮下组织，血管钳向前钝性分离头部皮肤与颅骨骨膜的疏松附着，分离范围：两侧近眶骨上缘1cm，前部距鼻翼2cm处。自皮肤切口处，于植入腔内植入容量为50ml的肾形扩张器，上海东月医疗保健用品有限公司产，产品批号：050301。植入前自注射壶注射无菌生理盐水检查扩张器有无渗漏。注射壶埋入颈部皮下，严密缝合皮肤切口。自注射壶注入无菌生理盐水5ml。术毕即刻肌肉注射庆大霉素8万单位，术后每日肌肉注射庆大霉素8万单位至术后3天。扩张器植入术后第3天开始扩张皮肤(见图1)。
1.3.1 A组：每日扩张1次；每次自注射壶注入无菌生理盐水20ml， 维持30min；然后抽出全部注入液体，间隔3h；照上述方法反复3次，最后一次抽出15ml液体，扩张器内留置5ml无菌生理盐水。每日重复上述步骤，10日完成注水。
1.3.2 B组：每日扩张1次；每次自注射壶注入无菌生理盐水5ml，10日完成注水。
1.3.3 C组：每3日扩张1次；每次自注射壶注入无菌生理盐水5ml，28日完成注水。
1.4 标本采集与处理：A、B组分别于扩张完成后维持1周、2周、3周、4周、6周；C组分别于扩张完成后维持1周、2周、3周、4周随机抽取4只动物留取标本。D组分别于植入扩张器后1周、2周、3周、4周、6周随机抽取1只动物留取标本。修剪表面毛发后，全麻下于扩张皮瓣中央处切取约1cm×1cm大小的扩张全层皮肤组织块。投入10%甲醛溶液中固定，常规脱水、透明、浸蜡、包埋，制成4μm连续切片。进行VEGF免疫组织化学观察。
1.5 VEGF阳性判定标准：VEGF表达主要见于细胞浆内，表现为棕黄色颗粒或黄褐色颗粒分布于胞浆中。VEGF阳性表达以胞浆胞膜有棕黄色颗粒为准。VEGF在上皮细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞均有表达。
1.6 VEGF含量的判定：采用计算机自动图像分析系统在高倍镜下(200×)沿皮肤纹路随机选取5个不同的皮肤组织区域，测定其阳性细胞所占比例，以阳性细胞染色的积分光度值(integrated optical density， IOD)来表示抗原表达量。阳性染色的积分光度越高，说明阳性细胞数量越多。
1.7 统计学处理：VEGF计量资料用均数±标准差(x±s)来表示，运用SPSS 11.5软件包进行统计学分析。以P<0.05具有统计学意义。
2 结果
2.1 一般情况：动物实验过程中 ......
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