EGCG对中波紫外线辐射后原代人角质形成细胞中光产物产生和清除的影响(2)
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2.4 EGCG对UVB辐射后光产物的产生和清除的影响：从图4A到图4C可以看出，UVB辐射前后加入EGCG处理细胞，细胞的损伤均较单纯照射组轻，表现为光学显微镜下的阳性细胞均较单纯照射组少。结果表明EGCG能够减轻UVB辐射对细胞的损伤，既能减少光产物的产生，也可以加快光产物的清除，各组间差异有统计学意义(P<0.05)，表3。
该资料符合Possion分布，对数据进行u检验。uEGCG+UVB组>1.96，P<0.05，uUVB+EGCG组>1.96，P<0.05，差别均有统计学意义。
3 讨论
UVB(280～320nm)诱发红斑和日晒伤，并与皮肤癌密切相关[7]。表皮细胞DNA直接吸收UVB的能量而产生光损伤。环氧嘧啶二聚体(CPDs)是最主要的DNA光损伤形式[8]，可以导致基因突变如C→T或CC→TT转换，成为皮肤癌的初始突变。皮肤细胞有多种DNA修复途径，可以依据紫外线介导不同损伤的类型来去除DNA损伤。UVB辐射产生的CPDs主要由核苷酸切除修复(NER)[9]。
茶多酚是绿茶提取物，其主要有效单体成分为没食子儿茶素没食子酸酯 EGCG，它有着广泛的生物学效应，如抗突变、抗肿瘤形成、抗炎抗病毒及清除自由基和抗氧化等[10]。研究证实，服用绿茶或其提取物(GTP，EGCG)可抑制多种肿瘤的产生[11]。本部分以原代KC为研究对象，采用免疫组织化学方法来观察和检测UVB辐射后原代KC中CPDs的产生和清除情况。我们分别检测了照光后不同时间点的CPDs阳性细胞数量以动态分析CPDs的产生与清除过程，同时还检测了不同紫外线强度以及加入EGCG干预条件下CPDs生成量的变化。实验结果表明，UVB辐射可以导致细胞DNA损伤，产生CPDs，照光后1h左右达到高峰。同时细胞自身也清除光产物，在开始的4h内清除速率较快；辐射后4h到24h，CPDs清除速率减慢。我们同时也观察了不同剂量(30、60、90mJ/cm2)UVB对细胞损伤的影响，结果表明随着UVB辐射剂量的增大，阳性细胞数目增多，显示出UVB对原代KC的损伤作用呈剂量依赖性，UVB辐射强度越大，CPDs产生越多；然而，随着UVB剂量的进一步增大，可能导致细胞直接坏死或凋亡，而不反映为CPDs产生增加，对此我们将在进一步研究中进行观察和分析。照光前后加入EGCG与细胞共同孵育，镜下阳性细胞数明显少于UVB照射组，这证实了EGCG的光保护作用，它可以抵抗紫外线，减少CPDs的产生。UVB辐射后立即分别加入EGCG溶液，与细胞共同孵育4h后进行检测，光学显微镜下阳性细胞数也明显少于UVB照射组，显示出EGCG可以加快光产物的清除，对细胞有光保护作用。
总之，UVB辐射可以导致原代KC的DNA损伤，产生光产物(CPDs)。辐射后细胞对光产物的清除存在快速清除期(0～4h)，以及随后的慢速清除期(4～24h)。细胞损伤的程度与UVB辐射的剂量存在着密切关系，随剂量增大而加重。UVB辐射前后加入EGCG可以减少光产物的产生和加快光产物的清除。
[参考文献]
[1]Pustisek N and Situm M. Protection against solar ultraviolet radiation in childhood [J].Coll Antropol，2011，35 Suppl 2： 343-346.
[2]Sjerobabski Masnec I，Poduje S.Photoaging[J].Coll Antropol，2008，32 Suppl，2：177-180.
[3]Jeon HY，Kim JK.Effects of oral epigallocatechin gallate supplementation on the minimal erythema dose and UV-induced skin damage[J].Skin Pharmacol Physiol，2009，22(3)：137-141.
[4]林向飞，骆丹，闵玮，等.UVB辐射后HaCaT细胞光产物的产生和清除及EGCG的干预作用[J].中国美容医学，2006，15(4)：384-386.
[5]Heo J，Lee BR，Koh JW.Protective effects of epigallocatechin gallate after UV irradiation of cultured human lens epithelial cells[J].Korean J Ophthalmol，2008，22(3)：183-186 ......
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