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编号:12332145
成骨诱导后的骨髓间充质干细胞对外周血单个核细胞增殖的免疫调节作用(2)
http://www.100md.com 2012年11月1日 解芳等
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    参见附件。

     1.2.5 第三方BMSCs、成骨诱导的BMSCs(OM-BMSCs)对于双向混合淋巴细胞反应(MLR)中PBMCs增殖的影响:96孔培养板共分三组,每组7个复孔,反应体系总量为200μl,不足者以淋巴细胞培养基补充。A组:将供体和受体犬PBMCs接种于96孔板中,5×104/孔,作为对照组;B组:A组各组分加入已铺被1×104/孔BMSCs的96孔板;C组:A组各组分加入已铺被1×104/孔OM-BMSCs的96孔板。96孔板放置于37℃,5%CO2培养箱内培养120h后,加入CellTiter96 Aqueous One Solution Assay 20μl,再放回细胞培养箱内孵育4h,用酶标仪在490nm波长测定PBMCs的OD值。OD值(B组-Blank1)代表B组PBMCs的增殖情况;OD值(C组-Blank2)代表C组PBMCs的增殖情况。

    1.2.6第三方BMSCs、OM-BMSCs对于经PHA刺激后的PBMCs增殖的影响:96孔培养板共分三组,每组7个复孔,反应体系总量为200μl,不足者以淋巴细胞培养基补充。D组:将受体犬PBMCs接种于96孔板中,5×104/孔,加入植物血凝素A(PHA),终浓度为1μg/ml,作为对照组;E组:D组各组分加入已铺被1×104/孔BMSCs的96孔板; F组:D组各组分加入已铺被1×104/孔OM-BMSCs的96孔板。96孔板放置于37℃,5%CO2培养箱内培养120h后,加入CellTiter96 Aqueous One Solution Assay 20μl,再放回细胞培养箱内孵育4h,用酶标仪在490nm波长测定PBMCs的OD值。OD值(E组-Blank1)代表E组PBMCs的增殖情况;OD值(F组-Blank2)代表F组PBMCs的增殖情况。

    1.2.7第三方BMSCs、OM-BMSCs对于经IL-2刺激后的PBMCs增殖的影响:96孔培养板共分三组,每组7个复孔,反应体系总量为200μl,不足者以淋巴细胞培养基补充。G组:将受体犬PBMCs接种于96孔板中,5×104/孔,加入IL-2、OKT3(anti-CD3 antibody),终浓度为100U/ml,作为对照组。H组:G组各组分加入已铺被1×104/孔BMSCs的96孔板;I组:G组各组分加入已铺被1×104/孔OM-BMSCs的96孔板。96孔板放置于37℃,5%CO2培养箱内培养120h后,加入CellTiter96 Aqueous One Solution Assay 20μl,再放回细胞培养箱内孵育4h,用酶标仪在490nm波长测定PBMCs的OD值。OD值(H组-Blank1)代表H组PBMCs的增殖情况;OD值(I组-Blank2)代表I组PBMCs的增殖情况 ......

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