雷帕霉素对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响(2)

http://www.100md.com 2014年2月1日 中国美容医学2014年第3期

     1.2.4 RT-PCR检测P70s6k、4E-BP1基因的表达情况：Trizol一步法提取细胞总RNA，分别抽提正常皮肤成纤维细胞组、瘢痕疙瘩成纤维细胞非药物干预组、瘢痕疙瘩成纤维细胞药物干预组(0.1nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L)，成纤维细胞的总RNA，调整RNA为1mg/L，以Beta-actin(β-actin)为内参对照，进行RT-PCR检测。P70s6k引物序列为：上游引物5'GGGTGGAGGATG-CATGTAT3'，下游引物5'ACACAAACATAGATGAACCCAT3'，产物为452bp；4E-BP1引物序列为：上游引物5'CCTGATGGAGTGTGG GAACT3'，下游引物5'CGGAAGGAAGGGTTCGT3'；产物为463bp；内参Beta-actin(β-actin)引物序列为：上游引物5'CTGGGACGACATGGAGAAAA3'，下游引物5'AAGGA-AGGCTGGAAGAGTGC3' ......