兔骨髓间充质干细胞在HA/CS支架中的增殖活性(2)
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1.3.4 体外观察与培养：培养物隔日换液，以倒置显微镜观察MSCs的基质分泌及其与HA/CS的粘附情况。
2 结果
2.1 原代细胞培养：原代细胞多呈圆形或椭圆形，第1次换液后可见大部分呈梭性的贴壁细胞，细胞形态变长；以后拉长的细胞增多，逐渐以梭形细胞为主，部分呈三角形；第 7天时可观察到数十个细胞聚集生长组成的集落(见图1)；集落逐渐增多，集落中细胞数量亦增多，细胞为成纤维样细胞；10～12天后集落相互融合，形成致密贴壁层，细胞呈草束状排列(见图2)。
2.2传代细胞：随传代次数增加，MSC的增殖能力开始减弱，细胞向多角形发展，生长速度降低；8代以后细胞胞体增大，生长速度明显减慢，细胞形态变为扁平，呈现老化现象(见图3)。其中第2、5代细胞增殖能力最强，第8代细胞与第2、5代细胞比较增殖能力明显减弱。
2.3 生长曲线：3代细胞生长曲线都呈S形，传代后的1～2天细胞进入生长滞缓期，细胞增殖数量不多，主要为MSCs的贴壁生长阶段，培养细胞的有丝分裂活动不太活跃；从第3日开始细胞增殖加速，相差显微镜下可以观察到贴壁细胞已形成大小不一的多个细胞克隆，第3～7日这些细胞克隆进一步扩大，许多细胞克隆彼此相连，细胞显示呈对数增长，为对数增长期；7～8天后增殖速度逐渐减慢进入平台期，细胞数目基本不再增多(见图4)。
2.4 高密度细胞悬液刚注入HA/CS复合支架材料时，在其边缘仅能看到少量圆形未贴壁的悬浮细胞，5天后可见其边缘细胞数量增多，且部分细胞形态变为梭形，小部分细胞仍呈圆形；随着培养时间的延长，支架上的细胞数量逐渐增加，但明显慢于二维培养的细胞增殖速度，增殖细胞聚集呈簇状。14天后观察可见大量细胞从支架材料中爬行出来，呈网状排列，在支架材料的周围可见大量梭形细胞生长状态良好(见图5、6) ......
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