cys蛋白酶-3对离体培养的骨骼肌蛋白降解的影响

http://www.100md.com 2014年4月1日 中国美容医学2014年第7期

     [摘要]目的：通过体外培养骨骼肌细胞，测定凋亡效应相关蛋白酶cys蛋白酶-3(caspase-3)及其抑制剂对骨骼肌细胞蛋白降解率的影响，探讨骨骼肌细胞凋亡的可能的调控因子。方法：0.5μg、1μg、2μg、4μg、8μg的肌动球蛋白复合体的反应体系中加入1单位的重组Caspase-3，通过Western Blot电泳。体外培养骨骼肌细胞，并刺激其形成肌管，将培养的骨骼肌分为3组，分别为对照组、实验组A加入1单位Caspase-3，实验组B加入50 nM Caspase-3的抑制剂Ac-DEVD-CHO，体系中均加入2mM ATP(三磷酸腺苷)。用氨基酸全谱分析仪测定酪氨酸和3-甲基组氨酸的浓度。结果：0.5μg、1μg、2μg、4μg、8μg的肌动球蛋白复合体和1单位的重组Caspase-3 ......
------
    吴焱秋 柴家科 张海龙 耿祎楠 解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所;

    【摘要】目的:通过体外培养骨骼肌细胞,测定凋亡效应相关蛋白酶cys蛋白酶-3(caspase-3)及其抑制剂对骨骼肌细胞蛋白降解率的影响,探讨骨骼肌细胞凋亡的可能的调控因子。方法:0.5μg、1μg、2μg、4μg、8μg的肌动球蛋白复合体的反应体系中加入1单位的重组Caspase-3,通过Western Blot电泳。体外培养骨骼肌细胞,并刺激其形成肌管,将培养的骨骼肌分为3组,分别为对照组、实验组A加入1单位Caspase-3,实验组B加入50 nM Caspase-3的抑制剂Ac-DEVD-CHO,体系中均加入2mM ATP(三磷酸腺苷)。用氨基酸全谱分析仪测定酪氨酸和3-甲基组氨酸的浓度。结果:0.5μg、1μg、2μg、4μg、8μg的肌动球蛋白复合体和1单位的重组Caspase-3,均可见到14kDa-actin条带,而肌动球蛋白复合体在0.5μg、1μg剂量时条带消失,在2μg、4μg、8μg时条带逐渐增大。与对照组相比,给予caspase-3后骨骼肌细胞总蛋白降解率增加36.9%,肌纤维蛋白降解率增加66.4%,给予DEVD后总蛋白降解率下降17.7%,肌纤维蛋白降解率下降27.7%。结论:caspase 3在体外可以降解肌动球蛋白复合体,而且还能改变骨骼肌蛋白降解率。caspase-3在骨骼肌蛋白降解中发挥了重要作用,参与了骨骼肌细胞的凋亡。

    【关键词】 骨骼肌 蛋白代谢 细胞培养 凋亡

    【基金】国家自然科学基金青年基金资助(项目编号30700867),项目负责人:吴焱秋

    【分类号】Q55

    骨骼肌是人体最大的含氮组织,是烧伤脓毒症时机体蛋白质丧失的主要来源。泛素-蛋白酶体途径在烧伤脓毒症骨骼肌蛋白的降解中起到一定作用,但其不能降解肌动球蛋白复合体(骨骼肌大分子原件)和肌原纤维[1],说明还有其他蛋白酶在泛素-蛋白酶体途径之前起作用。本研究采用体外培养