盐酸川芎嗪在长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞氧化应激中的作用(2)
HDF为原代培养的人皮肤成纤维细胞，取自门诊健康青年男(年龄18～23岁)包皮环切术后进行标本分离的包皮组织，采用酶消化法分离留取HDF细胞进行原代培养，连续传代，取第3～10代的细胞进行实验。
1.3 细胞分组和UVA照射
实验分组：20μg·ml-1盐酸川芎嗪组、50μg·ml-1盐酸川芎嗪组、100μg·ml-1盐酸川芎嗪组、UVA组(高糖DMEM培养液+UVA照射)、假照射组(高糖DMEM培养液，置UVA治疗仪下不开电源)，未给药组。HDF细胞接种于直径30mm的培养皿中，接种密度为1×104个/皿，置37℃，5%CO2培养箱中培养至刚开始出现融合时进行UVA照射，利用UVA辐射探测仪检测UVA的强度调整照射时间使照射剂量为10J，每日1次，连续照射5次。照射前吸出培养液，PBS洗涤1次，再以PBS覆盖细胞，置于冰上照射。
1.4 CCK-8法检测细胞体外增殖活性
取未经UVA照射及5次UVA照射后的HDF细胞，调整浓度为3.0×103个/ml接种于96孔板，每孔100μl，每组设3个复孔，培养24h，48h，72h后，吸去每孔旧培养液(避免药物吸光性影响OD值)，加入新鲜培养液(均无药物)100μl/孔，每孔再加入10μlCCK-8试剂 ......
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1.3 细胞分组和UVA照射
实验分组：20μg·ml-1盐酸川芎嗪组、50μg·ml-1盐酸川芎嗪组、100μg·ml-1盐酸川芎嗪组、UVA组(高糖DMEM培养液+UVA照射)、假照射组(高糖DMEM培养液，置UVA治疗仪下不开电源)，未给药组。HDF细胞接种于直径30mm的培养皿中，接种密度为1×104个/皿，置37℃，5%CO2培养箱中培养至刚开始出现融合时进行UVA照射，利用UVA辐射探测仪检测UVA的强度调整照射时间使照射剂量为10J，每日1次，连续照射5次。照射前吸出培养液，PBS洗涤1次，再以PBS覆盖细胞，置于冰上照射。
1.4 CCK-8法检测细胞体外增殖活性
取未经UVA照射及5次UVA照射后的HDF细胞，调整浓度为3.0×103个/ml接种于96孔板，每孔100μl，每组设3个复孔，培养24h，48h，72h后，吸去每孔旧培养液(避免药物吸光性影响OD值)，加入新鲜培养液(均无药物)100μl/孔，每孔再加入10μlCCK-8试剂 ......
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