胰岛素样生长因子—1对猪关节软骨细胞糖胺多糖的作用(2)
1.3.1 软骨组织的取材：小猪静脉麻醉后，在无菌操作下切取股骨远端、胫骨近端的软骨，75%酒精浸泡30min后，将软骨组织剪成1mm3左右的方块，置于离心管中，用PBS液冲洗3次。
1.3.2 消化：在盛有软骨碎块的离心管中加入2倍体积0.2%Ⅱ型胶原酶，放置37℃的恒温振荡床中振荡、消化。
1.3.3 收集细胞：3～4h后第一次收集软骨细胞。将悬浊液过滤筛滤去软骨组织，隔夜消化，第二天早上收集。过滤的液体离心，吸除消化液，加入PBS液，漂洗3次，加入细胞培养液6ml，振荡混和制成细胞悬液。锥虫蓝拒染实验观察软骨细胞的活力。
1.4 倒置显微镜下观察软骨细胞生长情况
将软骨细胞悬液以5×106/ml密度定量接种于经PLA包埋PGA支架上，形成软骨细胞支架复合体，培养1周，扫描电镜观察软骨细胞生长情况。
1.5 扫描电镜下观察软骨细胞生长情况
1.6 软骨细胞的培养和传代
将软骨细胞悬液密度调整为5×106/ml，以1 ml分别接种于塑料培养皿，加入6ml培养液(F-12培养液加10%胎牛血清)，置入37℃恒温培养箱(5% CO2)培养。经清洗、消化、过滤、离心收集，用血细胞计数板计数，HamsF-12培养液稀释为5×106/ml，以1ml分别接种到培养皿内，加入6ml培养液，置于37℃恒温培养箱(5%CO2)内培养 ......
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1.3.2 消化：在盛有软骨碎块的离心管中加入2倍体积0.2%Ⅱ型胶原酶，放置37℃的恒温振荡床中振荡、消化。
1.3.3 收集细胞：3～4h后第一次收集软骨细胞。将悬浊液过滤筛滤去软骨组织，隔夜消化，第二天早上收集。过滤的液体离心，吸除消化液，加入PBS液，漂洗3次，加入细胞培养液6ml，振荡混和制成细胞悬液。锥虫蓝拒染实验观察软骨细胞的活力。
1.4 倒置显微镜下观察软骨细胞生长情况
将软骨细胞悬液以5×106/ml密度定量接种于经PLA包埋PGA支架上，形成软骨细胞支架复合体，培养1周，扫描电镜观察软骨细胞生长情况。
1.5 扫描电镜下观察软骨细胞生长情况
1.6 软骨细胞的培养和传代
将软骨细胞悬液密度调整为5×106/ml，以1 ml分别接种于塑料培养皿，加入6ml培养液(F-12培养液加10%胎牛血清)，置入37℃恒温培养箱(5% CO2)培养。经清洗、消化、过滤、离心收集，用血细胞计数板计数，HamsF-12培养液稀释为5×106/ml，以1ml分别接种到培养皿内，加入6ml培养液，置于37℃恒温培养箱(5%CO2)内培养 ......
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