microRNA—130a抑制KGN细胞FOXL2基因的表达及对细胞增殖的影响(2)
1.2.4 Western Blot检测:细胞转染48 h后收集各孔KGN细胞,用含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞并提取细胞总蛋白,BCA法测定总蛋白浓度。取蛋白25μg/孔,以10%SDSPAGE跑胶分离,转PVDF膜,室温封闭2h,以FOXL2和GAPDH为一抗(抗体稀释比例分别为1∶5000和1∶500),4℃孵育过夜,洗膜,过氧化物酶耦联的二抗(稀释比例均1∶500)室温标记1h,ECL法显影 ......
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