5-Fu作用于瘢痕疙瘩成纤维细胞后Caspase-3变化的研究
1材料和方法,2实验结果,3讨论
王 鹏,弓军胜,李晋福,张宝林,郑若楠(1.山西医科大学第一临床医学院 山西 太原 030001;2.山西医科大学第一医院整形科 山西 太原 030001; 3.上海交通大学医学院附属第九人民医院 上海 200011)
5-Fu作用于瘢痕疙瘩成纤维细胞后Caspase-3变化的研究
王 鹏1,2,弓军胜2,李晋福1,张宝林2,郑若楠3
(1.山西医科大学第一临床医学院 山西 太原 030001;2.山西医科大学第一医院整形科 山西 太原 030001; 3.上海交通大学医学院附属第九人民医院 上海 200011)
目的:从蛋白层面证明瘢痕疙瘩、正常皮肤成纤维细胞中Caspase-3蛋白表达水平存在差异。通过5-fu(5-氟尿嘧啶)浓度梯度作用瘢痕疙瘩成纤维细胞后,观察细胞中Caspase-3蛋白的表达,及细胞增殖、迁移和侵袭性变化。方法:临床手术获取瘢痕疙瘩、正常皮肤组织块,培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast KF)及正常皮肤成纤维细胞(normal skin fibroblast NSF),应用免疫组织化学及Western blot检测组织块及细胞中Caspase-3蛋白的表达;将5-fu(5-氟尿嘧啶)浓度梯度作用瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)后,应用Western blot检测Caspase-3蛋白的表达;CCK-8法检测KF细胞增殖情况;Trans-wells小室实验检测KF细胞的体外迁移和侵袭能力。结果:瘢痕疙瘩组织、正常皮肤组织、KF、NSF中均有Caspase-3蛋白的表达;KF中Caspase-3蛋白表达水平明显低于NSF,差异有统计学意义(P<0.05),瘢痕疙瘩组织块中Caspase-3蛋白表达水平明显低于正常皮肤组织,差异存在统计学意义(P<0.05);5-fu作用KF后,Western blot显示随着5-fu浓度的降低,KF中caspase-3蛋白表达减少,差异存在统计学意义(P<0.05)。CCK-8结果显示,随着5-fu浓度的降低,对KF增值活性的抑制不断减弱,差异有统计学意义(P<0.05);Trans-well侵袭结果显示侵袭到下室的KF数目随5-fu浓度的不断降低,而增多。结论:Caspase-3在KF中的表达明显低于NS,同时是5-fu诱导KF凋亡的关键因子,5-fu以浓度依赖方式促进Caspase-3活性增高,同时抑制KF增值、侵袭、迁移等肿瘤特性。
瘢痕疙瘩成纤维细胞;正常皮肤成纤维细胞;5-氟脲嘧定子;Caspase-3蛋白;细胞凋亡 ......
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