喇文军，林孝发，蒋 伟，王 妍，尹卫民，林嘉欢，林 峰

    不同培养基对皮肤来源的成纤维细胞增殖、衰老及胶原蛋白分泌的影响

    喇文军1，林孝发1，蒋 伟1，王 妍1，尹卫民2，林嘉欢1，林 峰1

    (1.深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院 广东 深圳 518055；2.深圳市君焯医疗美容整形研究所广东 深圳 518040)

    目的：探讨不同培养基组成对皮肤成纤维细胞的增殖、衰老及胶原蛋白分泌的影响。方法：采用两步酶消化法从健康人耳后皮肤中获得成纤维细胞，依据培养基种类不同分为A组(FM无血清培养基)、B组(DMEM+10%FBS)、C组(RPMI-1640+10%FBS)、D组(DMEM+F12(1∶1)+10%FBS)，采用MTT法、细胞划痕实验、酶联免疫吸附实验、β-半乳糖苷酶试验、软琼脂克隆形成试验比较不同培养基对细胞增殖、迁移、胶原分泌、老化、变异的影响。结果：采用酶消化法在2d～4d内即可从组织块中获得大量成纤维细胞；其中B、D组较A、C组细胞增殖较快，且趋势与MTT细胞增殖相同；划痕实验显示B、D组较A、C组向缺损部位迁移更为明显；此外，D组胶原蛋白分泌量高于其余三组(P<0.05)，且连续传代30次后，细胞无明显衰老及瘤变迹象。结论：两步酶消化法可快速高效的从人组织块中获得成纤维细胞，且采用DMEM+F12(1∶1)完全培养基有利于促进细胞增殖、分泌胶原蛋白及延缓细胞衰老。

    成纤维细胞；培养基；胶原蛋白；细胞增殖；原代培养

    医疗技术的发展及人们生活水平的提高，使人类平均寿命得到有效延长的同时，也使延缓衰老渐渐进入人类视野。而皮肤作为人体最大的器官，其结构完整、美观不仅影响着心情，也体现其生活质量的高低。因此，越来越多的爱美人士渴望通过医疗技术干预皮肤老化。然而，目前市场主流的抗衰老产品多以化学药物或激光疗法为主，其短期效果明显，但长期效果及安全性却一直备受质疑[1-2]。自体细胞回输技术，其采用体外培养自体成纤维细胞达一定数目及活性后，将其回输入人体执行特定皮肤部位老化细胞的功能，从而对延缓皮肤衰老起到促进作用，具有更高的安全性及有效性[3]。然而，如何快速获得活性细胞在一定程度上制约了自体细胞回输技术的临床应用。因此，本研究对耳后皮肤中成纤维细胞进行提取，传代，通过研究不同培养基对成细胞细胞增殖、胶原分泌以及细胞传代中的稳定性进行分析，以期为该技术的推广应用提供依据。

    1 材料和方法

    1.1 材料：①正常耳后皮肤组织由深圳市君焯医疗美容整形研究所提供；A549肺癌细胞由深圳市大规模细胞培养技术和细胞资源库公共技术服务平台提供；②0.25%胰酶 ......