人骨髓间充质干细胞复合两种填充材料体外生物相容性的比较(2)
1.4.5 ePTFE和硅胶材料处理
1.4.5.1原材料直接处理：将ePTFES和硅胶分别置于15ml离心管内，用75%乙醇浸泡24h，无菌PBS冲洗3次，放入紫外操作台中照射30min后，无菌剪刀剪成1mm×2mm×2mm小块，两种材料的处理如图1。
1.4.5.2材料浸提液制备：称取相同质量的两种无菌材料，置于15ml离心管内，依次加入5ml完全培养基，室温下分别浸泡24h、48h、96h，将获得的浸提液于4℃保存待用。
1.4.6细胞黏附率测定：在24孔板培养板内分别植入备用的ePTFE和硅胶各8块，将浓度为1×108/L的细胞悬液0.2ml滴加到材料上，静置4h后，换于另一培养板，加入完全培养基，将原培养板中细胞消化收集，细胞计数仪计数，得出流失的细胞数；细胞材料复合物培养24h后，在培养液中轻轻晃动，换于另一培养板，重复上述步骤，得出未黏附细胞数，计算黏附率。黏附率=(接种细胞数流失细胞数未黏附细胞数)/(接种细胞数流失细胞数)×100%。
1.4.7细胞增殖能力测定
1.4.7.1原材料直接作用对hMSCs增殖的影响：将两种材料分别置于96孔培养板中，并设不加材料的空白对照组，每组5个复孔。将浓度为2×103/L细胞悬液按100μl/孔接种于培养板内，置于37℃、5%C02孵育箱内培养48h、96h、144h，每孔加入CCK-8 10μl，孵育3h，酶标仪在450nm波长处测定各孔吸光度OD值 ......
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1.4.5.1原材料直接处理：将ePTFES和硅胶分别置于15ml离心管内，用75%乙醇浸泡24h，无菌PBS冲洗3次，放入紫外操作台中照射30min后，无菌剪刀剪成1mm×2mm×2mm小块，两种材料的处理如图1。
1.4.5.2材料浸提液制备：称取相同质量的两种无菌材料，置于15ml离心管内，依次加入5ml完全培养基，室温下分别浸泡24h、48h、96h，将获得的浸提液于4℃保存待用。
1.4.6细胞黏附率测定：在24孔板培养板内分别植入备用的ePTFE和硅胶各8块，将浓度为1×108/L的细胞悬液0.2ml滴加到材料上，静置4h后，换于另一培养板，加入完全培养基，将原培养板中细胞消化收集，细胞计数仪计数，得出流失的细胞数；细胞材料复合物培养24h后，在培养液中轻轻晃动，换于另一培养板，重复上述步骤，得出未黏附细胞数，计算黏附率。黏附率=(接种细胞数流失细胞数未黏附细胞数)/(接种细胞数流失细胞数)×100%。
1.4.7细胞增殖能力测定
1.4.7.1原材料直接作用对hMSCs增殖的影响：将两种材料分别置于96孔培养板中，并设不加材料的空白对照组，每组5个复孔。将浓度为2×103/L细胞悬液按100μl/孔接种于培养板内，置于37℃、5%C02孵育箱内培养48h、96h、144h，每孔加入CCK-8 10μl，孵育3h，酶标仪在450nm波长处测定各孔吸光度OD值 ......
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