甘草次酸对光老化HaCaT细胞的保护作用及NF—κB信号通路影响(2)
2.5试剂盒检测HaCaT细胞中GSH、SOD活性及MDA含量：6孔板细胞参照2.4方式建立光老化模型。待细胞生长密度达80%～90%时，收集6孔板中各组细胞，PBS冲洗2次，RIPA裂解液和蛋白酶抑制剂PMSF以99：1混匀，按照100μl/孔加入混合液，冰盒上静置30min，4℃ 13200rpm的条件下离心15min，在冰盒上收集上清液于离心管中，按照试剂盒说明书检测各组细胞中GSH、SOD活性及MDA含量。
2.6 Western Blot法检测HaCaT中NF-κ BP50和NF-κ BP65蛋白表达量：收集6孔板中各组细胞，使用RIPA和PMSF混合液提取蛋白，BCA法测定各组细胞蛋白浓度，每孔加样20μl，8DS-PAGE电泳60min，半干转膜30min，室温封闭2h，加入一抗孵育，4℃过夜，TBST洗膜三次，加二抗室温孵育1h ......
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2.6 Western Blot法检测HaCaT中NF-κ BP50和NF-κ BP65蛋白表达量：收集6孔板中各组细胞，使用RIPA和PMSF混合液提取蛋白，BCA法测定各组细胞蛋白浓度，每孔加样20μl，8DS-PAGE电泳60min，半干转膜30min，室温封闭2h，加入一抗孵育，4℃过夜，TBST洗膜三次，加二抗室温孵育1h ......
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