痤疮患者外周血TLR—2、IL—4、IL—8、TNF—α表达水平与痤疮严重程度相关性研究(2)
1.2 纳入标准:①男女不限,自愿参加者;②无自身免疫性疾病者;③近1个月内系统及局部未使用维A酸类、糖皮质激素等药物者;④非药物性、职业性及经期前痤疮者。1.3 方法
1.3.1 仪器和试剂:FACSCAL-IBUR流式细胞仪(美国BD公司);FITC荧光素标记小鼠抗人CD14抗体,藻红蛋白(PE)标记小鼠抗人TLR2抗体及同型对照鼠抗人IgG抗体,1×红细胞裂解液,均购自eBioscience公司;血清IL-4、IL-8、TNF-α检测试剂盒均购自上海信裕生物科技有限公司。
1.3.2 标本采集及处理:所有参试者均晨间空腹采集肘静脉血5ml,其中3ml全血置于肝素抗凝管中,4℃冰箱保存,待流式细胞仪检测;另2ml置于消毒试管中,低温离心15min(2 500r/min),吸取上清液分装于Eppendorf管中,置-20℃冰箱保存待检。
1.3.3 流式细胞仪检测外周血CD14+单核细胞TLR-2表达:每份参试者标本各取3支样品测定管,依次加入相应抗体CDl4-FITC,IgG1-FITC/IgG2a-PE ......
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