miRNA—769—5p上调对正常人成纤维细胞生物活性的影响(2)
1 材料和方法1.1 材料:成纤维细胞取自于健康成年男性包皮组织。DMEM培养液购于美国Hyclone公司,小牛血清购于杭州四季青公司,Trizol核算提取液购于美国Invitrogen公司,CCK-8试剂盒购于日本Dojindo公司,DCFH氧化损伤试剂盒购于上海碧云天生物技术有限公司,miRNA转染试剂盒购于广州锐博生物科技有限公司,UVA、UVB照射仪购于上海希格玛高技术有限公司。
1.2 方法
1.2.1 细胞的分离与培养:获得包皮后,用含青-链霉素的PBS反复冲洗3次至无肉眼可见血迹,剪去包皮皮下组织,将其剪成约0.5cm×0.5cm大小皮片,PBS冲洗3次后弃PBS,加入分散酶,放入4℃冰箱中消化18~20h后将表皮和真皮分离。取真皮部分,加入胶原酶消化液,放入37℃细胞培养箱中消化2h,取出后加入含10%胎牛血清的DMEM培养基,吹打过滤后离心,之后弃细胞上清液,加入含10%胎牛血清及1%青-链霉素的DMEM培养基,转移至培养皿中,放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养 ......
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