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编号:13313025
PDGF—BB对UVB诱导的光老化成纤维细胞中ROS的影响(2)
http://www.100md.com 2018年3月1日 《中国美容医学》 2018年第5期
     1 材料和方法

    1.1 小鼠皮肤细胞的获取:取1~3d新生SPF级C57 BL/6小鼠,乙醚麻醉后浸泡于75%乙醇中8~10min,用灭菌PBS洗去残留乙醇,无菌条件下分离其背部皮肤,留取1cm×1cm皮肤组织,立即置于2%中性蛋白酶中,密封,4℃冰箱过夜;将皮肤取出后分离表皮与真皮,剪碎真皮,置于0.1%胶原酶中,37℃恒温摇床消化2h,待组织团块基本消失可离心,1 500r/min离心5min,收集沉淀;弃去上清,用DMEM+10% FBS制成细胞悬液,吹打均匀后以约2×105/cm2密度接种于培养皿置于常规培养箱中培养;待2~3d后,细胞近80%~90%融合时进行传代,比例约为1:4。

    1.2 药物预处理及光老化模型的建立:选用P1代细胞,首先利用含不同PDGF-BB浓度DMEM+10% FBS处理约48h。本研究中,成纤维细胞随机分为4组:正常组(无PDGF-BB预处理,无UVB辐照),PDGF-BB组(PDGF-BB预处理,无UVB辐照),UVB组(无PDGF-BB预处理 ......
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