内质网应激蛋白ATF4调控STAT3信号通路促进黑色素瘤细胞生长及转移的研究(2)
1 材料和方法1.1 细胞培养:黑色素细胞系(HEMn-MP和HEMn-DP)和黑色素瘤细胞系(Mel-CV, MM200, A2058, A375和SKMel-28)均购自于中国科学院上海生命科学研究院细胞库。所有细胞系均使用含10%胎牛血清(FBS,购自于Gibico公司)的DMEM高糖培养基(购自于Corning公司)培养,培养条件为37℃,5% CO2。
1.2 荧光定量PCR:荧光定量PCR检测方法参考文献[18]。细胞在经过相应培养或处理后,使用TRIZol(购自Invitrogene公司)固定细胞并按照产品说明提取细胞内总RNA,然后使用Takara公司RNA逆转录试剂盒将总RNA逆转录成cDNA。获得的cDNA使用Power SyberGreen Mix试剂盒(购自ABI公司)进行荧光定量PCR检测,检测机器为ABI公司生产7900荧光定量PCR仪。
1.3 免疫印迹:免疫印迹技术检测细胞中蛋白表达水平,具体方法参考文献[19]。细胞在经过相应培养或处理后,使用RIPA固定并裂解细胞 ......
您现在查看是摘要页,全文长 4213 字符。