阻断Notch信号的角质形成细胞对成纤维细胞增殖及分泌功能的影响研究(3)
本研究中，通过建立角质形成细胞与成纤维细胞的共培养体系，在体外模拟创伤修复过程中两种细胞间的相互作用，观察给予Notch信号阻断剂后细胞活化状态以及细胞因子分泌情况。实验组中，在角质形成细胞分化早期，给予γ-分泌酶抑制劑(DAPT)阻断角质形成细胞中的Notch信号，以观察阻断Notch信号后的角质形成细胞对成纤维细胞增殖能力。对照组中，在分化前单纯给予角质形成细胞血清刺激[20]，诱导其活化。在将活化后的角质形成细胞加入共培养体系后，Notch-1、Jagged-1表达明显升高，同时下游信号P21表达上调、P63表达下降，表明Notch信号明显活化。而DAPT组中，由于在血清刺激前给予角质形成细胞DAPT预处理阻断Notch信号，复合培养时Notch-1、Jagged-1表达明显低于血清刺激组，与无血清组相同，且Notch信号下游分子P21和P63的表达也恢复至无血清刺激水平，表明DAPT组确实阻断了角质形成细胞中的Notch信号的活化。而Dong Shihua等[21]的研究中也证明，通过miR-22分子阻断P21分子信号通路后，可抑制瘢痕的增生。本实验中阻断P21分子上游Notch信号，应可以达到更好的治疗效果。而DAPT是否在整个复合培养阶段都能够抑制Notch信号的表达，作者认为Notch信号作为细胞内最重要的信号通路之一，本身不应该被过分抑制。本次实验是通过血清刺激模型模拟人体受伤时的机制，即角质形成细胞即刻接收到血清的刺激，而后发生愈合的过程。在人体正常的愈合过程中，血清并没有持续的刺激角质形成细胞，所以笔者认为Notch信号可能在伤口愈合的初期参与了角质形成细胞的修复过程，从而出现了过度分化的异常，对成纤维细胞也产生了影响。若是在整个复合培养阶段完全抑制Notch信号，则无法模拟人体创伤后正常愈合的过程。DAPT组利用DAPT阻断Notch信号后，成纤维细胞的增殖能力也明显下降。成纤维细胞作为增生性瘢痕及瘢痕疙瘩发病过程中最重要的病理性细胞[22]，其增值减少可对患者产生良好治疗效果。Wang 1等[23]的研究也发现，通过抑制成纤维细胞的增殖，可成功防止增生性瘢痕的产生。
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同时，通过DAPT阻断Notch信号后，细胞因子KGF、TGF-β1的表达相对于血清刺激组明显下降，与无血清组比较，差异无统计学意义。证明在混合培养体系中，阻断Notch信号可明显减少KGF、TGF-β1的表达，使其合成KGF、TGF-β1的量恢复至无血清刺激水平。而炎症因子过度分泌可加重炎症反应，刺激瘢痕增生。相关研究表明TGF-β在增生性瘢痕及瘢痕疙瘩的发病过程中有重要作用[24]。而Wang W.等[25]的研究通过抑制TGF-β的表达及分泌，阻断MAPK/ERK信号通路，可显著抑制瘢痕增殖，从而治疗增生性瘢痕。
综上，本实验证明，DAPT可明确阻断角质形成细胞Notch信号通路并降低其下游分子P21、P63表达。Notch信号通路阻断后，成纤维细胞的增殖明显减少，促炎因子KGF、TGF-β1的分泌也明显降低。而近期有研究证实：在瘢痕疙瘩的真皮中有过量的Notch-1、Notch-2和Jagged-1的表达，并且DAPT能够抑制瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞中Notch信号的表达、成纤维细胞的增殖和迁移[26]。表明Notch信号可能同时作用于表皮和真皮层，从而促进瘢痕的增生。本实验利用共培养模型，对瘢痕增生的机制进行研究，针对Notch信号进行靶向性阻断，为临床治疗增生性瘢痕提供了新的方向与思路。
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[参考文献]
[1]Zhu F，Wu B，Li P，et al.Association study confirmed suscq)tibility loci with keloid in the Chinese Hanpopulation[J].PLoS One，2013，8(5)：e62377.
[2]Lee KC，Dretzke J，Grover L，et al.A systematic review of objectivebum sear measurements[J].Bums Trauma，2016，4：14.
[3]Mundy LR，Miller HC，Klassem AF，et al.Patient-Reported outcomeinstruments for surgical and traumatic scars： a systematic review of theirdevelopment，content，and psychometric validation[J].Aesthetic PlastSurg，2016，40(5)：792-800.
, 百拇医药
[4]Chiang RS，Borovikova AA，King K，et al.Current concepts relatedto hypertrophic scarring in burn injuries[J].Wound RepairRegen，2016，24(3)：466-477.
[5]Rabello FB，Souza CD，Farina Junior JA.Update on hypertrophic scartreatment[J].Clinics(Sao Paulo)，2014，69(8)：565-573.
[6]Lim IJ1，Phan TT，Bay BH，et al.Fibroblasts cocultured with keloid-derived keratinocytes： normal fibroblast secrete collagen in a keloidlikemanner[J].Am J Physiol Cell Physiol，2002，283(1)：C212-C222., 百拇医药(楚菲菲 王大雷 闫伦 李辉超 夏炜 马显杰)
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同时，通过DAPT阻断Notch信号后，细胞因子KGF、TGF-β1的表达相对于血清刺激组明显下降，与无血清组比较，差异无统计学意义。证明在混合培养体系中，阻断Notch信号可明显减少KGF、TGF-β1的表达，使其合成KGF、TGF-β1的量恢复至无血清刺激水平。而炎症因子过度分泌可加重炎症反应，刺激瘢痕增生。相关研究表明TGF-β在增生性瘢痕及瘢痕疙瘩的发病过程中有重要作用[24]。而Wang W.等[25]的研究通过抑制TGF-β的表达及分泌，阻断MAPK/ERK信号通路，可显著抑制瘢痕增殖，从而治疗增生性瘢痕。
综上，本实验证明，DAPT可明确阻断角质形成细胞Notch信号通路并降低其下游分子P21、P63表达。Notch信号通路阻断后，成纤维细胞的增殖明显减少，促炎因子KGF、TGF-β1的分泌也明显降低。而近期有研究证实：在瘢痕疙瘩的真皮中有过量的Notch-1、Notch-2和Jagged-1的表达，并且DAPT能够抑制瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞中Notch信号的表达、成纤维细胞的增殖和迁移[26]。表明Notch信号可能同时作用于表皮和真皮层，从而促进瘢痕的增生。本实验利用共培养模型，对瘢痕增生的机制进行研究，针对Notch信号进行靶向性阻断，为临床治疗增生性瘢痕提供了新的方向与思路。
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