痤疮患者和健康人群痤疮丙酸杆菌多序列位点分型分子流行病学研究(2)
1.2 痤疮丙酸杆菌的分离、培养及鉴定:将BBA平板置于厌氧罐中37℃恒温培养72~96h,观察琼脂表面是否有肉眼可见的淡黄色、半透明、圆形、凸起的菌落生长。选取可疑菌落进行革兰染色镜检,将镜下呈现革兰阳性、分节状排列、呈杂乱粗大杆菌的单菌落进行双份转种,一份继续厌氧培养,另一份使用VITEK2全自动细菌鉴定系统进行菌株鉴定。1.3 细菌全基因组DNA提取:分离、培养鉴定到的54株痤疮丙酸杆菌临床株,使用北京TIANGEN公司细菌基因组提取试剂盒提取全基因组DNA,0.7%琼脂糖凝胶电泳检测,-20℃冰箱保存备用。
1.4 PCR擴增管家基因:用于PCR扩增的引物序列参照Http://pacnes.mlst.net/,实验中分析的9个管家基因及其编码产物如下:cel(Transcription regulator ),转录调节因子;coa(O-succinylbenzoate-CoA synthase),O-琥珀酰苯甲酸-CoA合成酶;fba(Fructose bisphosphate aldolase) ......
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