壳聚糖支架负载SHH和CM—Dil标记的脂肪干细胞移植后存活分化研究(1)
[摘要]目的：观察壳聚糖支架负载音猬因子(Sonic hedgehog，SHH)和脂肪干细胞(adipose-derived stem cells， ADSCs)移植后，ADSCs存活分化的效果。方法：将健康C57BL/6小鼠随机分为A组(PBS+ADSCs)、B组(SHH+ADSCs)、C组(壳聚糖+ADSCs)、D组(壳聚糖+SHH+ADSCs)。将各组混合物分别注射到小鼠背部皮下。术后1、2、4、8周处死小鼠，通过对移植组织一般观察、荧光显微镜观察、HE染色、免疫组化染色来评价移植细胞存活分化的情况。结果：术后8周，壳聚糖支架完全降解，大体观察、HE染色、免疫组化染色均说明壳聚糖支架同时搭载SHH和ADSCs脂肪干细胞存活率较高，新生血管增加，效果均优于A、B、C三组。结论：壳聚糖支架同时负载SHH和ADSCs可有效促进干细胞存活，显著增加血管组织数量。
[关键词]可注射性；壳聚糖；音猬因子；脂肪干细胞；干细胞移植
[中图分类号]R329 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455(2018)10-0129-04
, 百拇医药
Abstract： Objective The aim of our research is to observe the survival and differentiation of adipose Derived stem cells after transplantation with injectable chitosan scaffold loaded with SHH and adipose stem cells. Methods Thirty healthy C57BL/6 mice were selected. Random division group A mixture of PBS and ADSCs，group B mixture of SHH and ADSCs，group C chitosan scaffold loaded with ADSCs，group D chitosan scaffold loaded with SHH and ADSCs.After 1，2，4 and 8 weeks analysis involved general observation，HE staining，immunohistochemical staining of the survival and differentiation of transplanted cells. Results Eight weeks after operation， chitosan scaffold were completely degraded. After 8 weeks，analysis involved general observation，HE staining and immunofluorescence staining showed that Chitosan scaffold loaded with SHH and ADSCs could effectively increase the survival rate of adipose stem cells，increase angiogenesis. All the results were better than that of A、B、C group. Conclusion Chitosan scaffold loaded with SHH and ADSCs can effectively promote the survival of stem cells and spontaneously differentiate into mature adipocytes and increase the number of vascular tissues.May serve as a promising strategy for improving the survival of ADSCs graft survival rate.
, 百拇医药
Key worlds： syringeability； chitosan； SHH； adipose stem cells； stem cell transplantation
自體游离脂肪是临床上较安全的软组织修复填充材料，但脂肪移植后微血管被破坏，组织处于缺血期，导致细胞死亡[1]，致其存活率降低，临床应用受到极大限制。脂肪干细胞以其来源丰富、易获取、能在体外多代稳定增殖、具有多向分化潜能、免疫相容性好、取材对患者损伤小等优点已成为临床研究热点[2-3]。单纯干细胞移植，因细胞缺乏粘附点呈漂浮状态，即缺乏良好的移植微环境，不利于细胞的存活和正常功能的发挥。壳聚糖因其生物降解性、非抗原性、无毒性，抗菌活性以及良好的生物粘附性和细胞亲和力，被广泛用作细胞载体[4]。本实验将ADSCs同时或分别混合SHH和壳聚糖支架，注射入小鼠的背部皮下，观察细胞移植后存活分化的效果。
1 材料和方法
, 百拇医药 1.1 实验动物及材料：实验动物：健康雌性C57BL/6小鼠20只，体重18～22g，由昆明医科大学实验动物学部提供。主要试剂：胎牛血清(德国Capricorn Scientific)，L-DMEM培养基(美国hyclone)，DMSO(美国sigma)，PBS(美国gibco)，D-PBS(美国gibco)，I型胶原酶(北京索莱宝科技有限公司)，CM-Dil(美国Invitrogen)，SHH(美国R&D)，即用型一抗(丹麦Dako)，壳聚糖(美国sigma)，tunel试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 小鼠ADSCs原代培养及鉴定：C57BL/6小鼠断颈处死后取腹股沟处脂肪组织，参照陈军等[5]的方法进行ADSCs的分离培养，传至第五代，行流式细胞仪检测及成脂成骨分化鉴定。, 百拇医药(罗鸣骜 伍尚敏 苏晓三 高嘉 于璐 王翼寅 甘凤山)
[关键词]可注射性；壳聚糖；音猬因子；脂肪干细胞；干细胞移植
[中图分类号]R329 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455(2018)10-0129-04
, 百拇医药
Abstract： Objective The aim of our research is to observe the survival and differentiation of adipose Derived stem cells after transplantation with injectable chitosan scaffold loaded with SHH and adipose stem cells. Methods Thirty healthy C57BL/6 mice were selected. Random division group A mixture of PBS and ADSCs，group B mixture of SHH and ADSCs，group C chitosan scaffold loaded with ADSCs，group D chitosan scaffold loaded with SHH and ADSCs.After 1，2，4 and 8 weeks analysis involved general observation，HE staining，immunohistochemical staining of the survival and differentiation of transplanted cells. Results Eight weeks after operation， chitosan scaffold were completely degraded. After 8 weeks，analysis involved general observation，HE staining and immunofluorescence staining showed that Chitosan scaffold loaded with SHH and ADSCs could effectively increase the survival rate of adipose stem cells，increase angiogenesis. All the results were better than that of A、B、C group. Conclusion Chitosan scaffold loaded with SHH and ADSCs can effectively promote the survival of stem cells and spontaneously differentiate into mature adipocytes and increase the number of vascular tissues.May serve as a promising strategy for improving the survival of ADSCs graft survival rate.
, 百拇医药
Key worlds： syringeability； chitosan； SHH； adipose stem cells； stem cell transplantation
自體游离脂肪是临床上较安全的软组织修复填充材料，但脂肪移植后微血管被破坏，组织处于缺血期，导致细胞死亡[1]，致其存活率降低，临床应用受到极大限制。脂肪干细胞以其来源丰富、易获取、能在体外多代稳定增殖、具有多向分化潜能、免疫相容性好、取材对患者损伤小等优点已成为临床研究热点[2-3]。单纯干细胞移植，因细胞缺乏粘附点呈漂浮状态，即缺乏良好的移植微环境，不利于细胞的存活和正常功能的发挥。壳聚糖因其生物降解性、非抗原性、无毒性，抗菌活性以及良好的生物粘附性和细胞亲和力，被广泛用作细胞载体[4]。本实验将ADSCs同时或分别混合SHH和壳聚糖支架，注射入小鼠的背部皮下，观察细胞移植后存活分化的效果。
1 材料和方法
, 百拇医药 1.1 实验动物及材料：实验动物：健康雌性C57BL/6小鼠20只，体重18～22g，由昆明医科大学实验动物学部提供。主要试剂：胎牛血清(德国Capricorn Scientific)，L-DMEM培养基(美国hyclone)，DMSO(美国sigma)，PBS(美国gibco)，D-PBS(美国gibco)，I型胶原酶(北京索莱宝科技有限公司)，CM-Dil(美国Invitrogen)，SHH(美国R&D)，即用型一抗(丹麦Dako)，壳聚糖(美国sigma)，tunel试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 小鼠ADSCs原代培养及鉴定：C57BL/6小鼠断颈处死后取腹股沟处脂肪组织，参照陈军等[5]的方法进行ADSCs的分离培养，传至第五代，行流式细胞仪检测及成脂成骨分化鉴定。, 百拇医药(罗鸣骜 伍尚敏 苏晓三 高嘉 于璐 王翼寅 甘凤山)
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