富血小板纤维蛋白联合脂肪干细胞对糖尿病小鼠皮肤创面愈合的影响研究(3)
1.6.2 创面愈合情况:于伤后3、7、10、14d,肉眼观察创面变化、肉芽组织生长等情况,同时采用数码照相机对所有创面照相,比较创面大小,并通过Image-Pro Plus 6.0软件测算创面未愈合面积,并计算创面愈合率。创面愈合率=(创面初始面积-未愈合面积)/创面初始面积×100%。1.6.3 创面组织病理学观察:于伤后14d,将裸鼠30g/L戊巴比妥钠经腹腔注射(30mg/kg)麻醉,切取创面及创周3mm组织。将组织立即浸于10%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋、切片(厚度为5μm),HE染色,于100倍光学显微镜下观察创面组织病理学改变。采用Image-Pro Plus 6.0软件采集图像,每张切片在肉芽组织范围内100倍光学显微镜下相同部位选取3个视野,比较各组毛细血管平均数量。
1.6.4 创面组织CD31表达情况:采用免疫组织化学染色法,取多聚甲醛固定后创面组织切片,常规抗原修复后,加入体积分数3%过氧化氢室温孵育10min,PBS冲洗后置于0.01mmol/L枸橼酸缓冲液(pH值为6.0)中行微波抗原修复20min,分别加入CD31一抗(稀释比为1:50) ......
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