不同冻存时间对脂肪组织生物学活性的影响(2)
1 材料和方法1.1 临床组织标本
1.1.1 人自体脂肪组织颗粒临床样本来源:本实验所用标本均取自于中国人民解放军总医院第四医学中心烧伤整形科,供者为进行吸脂术的健康成年女性,年龄24~38岁,取脂部位为腹部及大腿。实验样本的采集均经过患者本人知情同意,并经医院机构审查委员会批准。
1.1.2 脂肪组织颗粒获取与纯化:供区肿胀麻醉后,使用侧孔直径1mm、针管直径3mm的多侧孔吸脂针,连接20ml注射器进行吸脂。使用林格氏液漂洗获取脂肪组织颗粒,并剔除粗大纤维结缔组织,垂直静置分层后去除下层的肿胀液及血液混合物(此过程可重复操作多次)。之后于温控离心机中以1 000r/min离心3min。弃掉上层的油脂及底层液体,保留中层脂肪组织。
1.2 试剂和仪器
1.2.1 试剂:HE染色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司),Anti-Perilipin-1抗体(英国Abcam),山羊Anti-Rabbit IgG H&L(Alexa Fluor? 647)(英国Abcam) ......
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