丹参酚酸B对过氧化氢引起的黑素细胞凋亡的保护作用研究(2)
1.2.2 细胞活力检测：采用四甲基偶氮唑蓝色法(MTT法)。以不同浓度的丹参酚酸B作为试验组，10mmol/L的NAC作为阳性对照组，只加H2O2为阴性对照组，不加任何药物处理作为空白对照组。黑素细胞以1×105个/ml浓度接种于96孔板，每孔加细胞悬液100μl，每组设3个复孔，过夜贴壁后，首先测定丹参酚酸B的安全浓度，不同浓度的丹参酚酸B作用于黑素细胞24h，每孔加5mg/ml MTT溶液20μl，培养4h后，弃上清，加100μl DMSO低速震荡5min，以波长490nm酶标仪测定吸光度值[6]。计算出安全浓度范围后，加入丹参酚酸B或NAC预处理1h，再加入250μmol/L的H2O2，37℃孵箱作用24h。1.2.3 Annexin-V/PI双染法流式细胞术凋亡检测：细胞分组及处理同上。按TACS Annexin-V-FITC试剂盒说明操作，培养细胞消化、离心，每个样本加入FITC荧光标记的Annexin-V和PI各10μl ......
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