1 材料和方法

    1.1 细胞及培养：HKF购于上海雅吉生物科技有限公司，含10%胎牛血清的DMEM-1640培养液(上海恒斐生物科技有限公司)进行培养，条件为37℃、5% CO2。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞活力测定：细胞计数试剂盒购于上海新睿生物有限公司。HKF(1×104个/ml)接种于96孔板中，培养24h。不同剂量(1×106/ml细胞分别加入肉毒毒素0μl、1.0μl和2.5μl)A型肉毒毒素(使用时稀释为50U/ml，兰州生物制品研究所)干预1d、2d、3d、4d和5d后，每孔加入10μl CCK-8，培养2.5h。微孔板阅读器(芬兰雷勃公司)450nm处读取吸光度。

    1.2.2 流式细胞术检测凋亡：Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒购于艾美捷科技有限公司。HKF(2×105个/孔)接种于6孔板中，培养24h。不同剂量A型肉毒毒素干预72h后，300×g室温离心5min，收集各孔HKF，冷PBS洗涤两次。将细胞重悬在500μl缓冲液中 ......