1.4 方法

    1.4.1 HaCaT细胞培养：将冻存状态的HaCaT细胞于37℃下快速复苏后，接种于培养瓶中，加入含10%胎牛血清及1%青-链霉素的DMEM培养液，置于37℃、5% CO2培养箱中培养，待细胞接近长满单层后胰酶消化并传代。

    1.4.2 LB母液制备：将20mg LB溶解于800μl DMSO，制备成浓度为25mg/ml的母液，分装，-80℃保存备用。

    1.4.3 MTT细胞增殖抑制实验：取对数生长期的HaCaT细胞，经消化、重悬、计数后，调整细胞密度为5×104/ml，每孔100μl细胞悬液接种于96孔板，空白调零组加不含细胞的培养液100μl，边缘孔100μl PBS填充。置于培养箱中培养24h贴壁后取出，弃去培养液，分别加含不同浓度LB(2.5、5、10、25、50μg/ml)10%胎牛血清DMEM培养液，平行5孔，阴性对照组加入含0.2% DMSO的培养液。继续培养48h后弃上清液，PBS洗1次，每孔加入MTT(5mg/ml)与含10%胎牛血清DMEM按1：10体积配置的培养液100μl ......