血管生成素-2上调增强血管瘤干细胞血管形成能力的研究(2)
1.2 慢病毒转染及细胞分组:根据细胞MOI及病毒滴度,干预组加入相应病毒量(Ang2上调),阴性对照组以相同条件加入无义慢病毒(Ang2-254),空白对照组以相同条件加入等体积PBS;转染成功后每孔加嘌呤霉素0.2mg/ml筛选稳转株,稳转株以筛选浓度的一半浓度的嘌呤霉素维持培养。1.3 血管形成实验:将圆形比例盖玻片置于12孔板中,将Matrigel按200μl/孔均匀包被盖玻片,置于培养箱孵育30min,待凝胶成固体。将三组血管瘤干细胞(HemSCs)分别以1×105个/孔接种,加培养基培养,每8h观察拍照,Image J软件计算不同组中分支点及毛细管长度。
1.4 蛋白浓度测定:提取不同组细胞中的蛋白,BCA测定蛋白浓度。把蛋白样品(20μg)上样到SDS-PAGE胶加样孔内,转PVDF膜60min。2%的BSA室温下孵育2h,一抗4℃孵育过夜,室温孵育二抗2h,扫描成像,并分析条带灰度值。
1.5 统计学分析:应用SPSS 23.0软件通过Student t检验或方差分析(ANOVA)进行数据统计分析 ......
您现在查看是摘要页,全文长 3917 字符。