hPlGF-2基因修饰的骨髓间充质干细胞对皮肤创伤修复及血管形成的作用研究(3)
1.2.5 PCR反应:使用TIRzol试剂盒提取感染后BMSCs的总RNA,以总RNA为模板进行反轉录,通过PCR法在mRNA水平检测hPlGF-2基因的表达情况,以空病毒pAdTrack-CMV感染48h的BMSCs总RNA为模板的检测作为对照。扩增结束后使用1.5%琼脂糖凝胶电泳进行检测PCR产物。1.2.6 Western blot检测:RIPA裂解缓冲液提取感染后BMSCs的总蛋白,BCA法进行蛋白浓度测定,10% SDS-PAGE电泳分离蛋白,切胶并转移至PVDF膜,5%脱脂奶粉室温封闭2h,加入兔抗hPlGF-2(1:1 000)、兔抗GAPDH(1:1 000)在4℃下孵育过夜。PBS洗涤PVDF膜后,将其与HRP 标记的二抗(1:5 000)常温孵育1h,洗膜并滴加ECL发光液进行曝光,使用Image-Pro Plus 6.0分析蛋白质灰度值。
1.2.7 MTT法:将正常BMSCs、pAdTrack-CMV空载体感染的BMSCs及重组腺病毒pAd/hPlGF-2感染的BMSCs ......
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