杨 靖，谢 群

    (襄阳市中心医院整形美容科 湖北 襄阳 441000)

    瘢痕疙瘩是皮肤伤口愈合的病理反应，其特征是成纤维细胞的异常增殖和胶原的过度沉积，临床表现为创面边缘外的持续性肿瘤样增生和邻近组织侵犯。瘢痕疙瘩的复发率高，许多治疗方法包括切除和病灶内注射皮质类固醇疗效不令人满意。因此，亟需寻找有效治疗瘢痕疙瘩的药物。原花青素是从植物中提取出的生物类黄酮，具有强抗炎和抗氧化作用，最早作为抗肝纤维化的药物进行研究，但对瘢痕疙瘩的作用研究尚未报道。在纤维化的发病过程中，静息状态下的造血干细胞在外界因素的刺激下被激活转化为成纤维细胞，并合成和分泌大量的细胞外基质成分(Extracellular matrix components，ECM)，导致纤维化。临床研究表明，纤维化通常伴有血清炎性细胞因子水平升高。此外，越来越多的研究表明，脂多糖激活的Toll样受体4(Toll-like receptor 4，TLR4)信号通路在纤维化中起重要作用。TLR4可通过髓样分化因子88(MyD88)蛋白激活核转录因子κB(Nuclear factor kappa B，NF-κB)信号通路，诱导炎症反应。而炎症反应可导致细胞增殖增加，使细胞凋亡紊乱，进一步促进纤维化的发展。因此，本研究检测原花青素对瘢痕疙瘩成纤维细胞(Keloid fibroblasts，KFs)增殖和迁移的影响，并探讨TLR4/MyD88通路在整个过程中的作用，为原花青素治疗瘢痕疙瘩提供理论依据。

    1 资料和方法

    1.1 主要试剂与仪器：原花青素(中国医学科学院药物研究所)；KFs细胞(中国科学院上海细胞库)；胎牛血清和DMEM培养液(美国Hyclone公司)；四噻唑蓝(MTT)(美国Amresco公司)；(Annexin)V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(江苏凯基生物技术股份有限公司)；白介素-23(Interleukin-23，IL-23)、白介素-17A(Interleukin-17A，IL-17A)和白介素-6(Interleukin-6，IL-6)(南京建成生物工程研究所)；Trizol(美国Invitrogen公司)；mRNA反转录试剂盒和荧光定量PCR试剂盒[宝生物工程(大连)有限公司]；RIPA裂解液(北京索莱宝生物技术公司)；TLR4、MyD88、NF-κB和β-actin抗体(美国Santa Cruz公司)；辣根过氧化物酶标记的IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司)；ECL化学发光液(美国GE公司)；CO细胞培养箱和NanoDrop2000c型蛋白核酸检测仪(美国Thermo公司)；HBS-1096B酶标仪(南京德铁实验设备有限公司)；Real-time PCR扩增仪(美国ABI公司)；流式细胞仪和垂直电泳仪(美国BIO-RAD公司) ......