高效液相色谱法测定亚胺培南-西司他丁钠的含量
【摘要】亚胺培南-西司他丁钠为新型β-内酰胺类抗生素,既有极强的厂谱抗菌活性,又有β-内酰胺酶抑制作用。采用高效液相法色谱测定亚胺培南-西司他丁钠,方法可靠、简便、准确。
【关键词】西司他丁钠; 高效液相色谱法
【中图分类号】R927.1 【文献标识码】A 【文章编号】1008-6455(2010)08-0254-01
1 仪器与试药
岛津LC2010A型高效液相色谱仪,Waters millipore真空泵,SB5200型超声波仪,F13型酸度计,岛津MultiSpec1501紫外分光光度计。CS原料3批;CS对照品(纯度97.8%)由我市药品检验所提供;乙腈为色谱纯,磷酸铵、磷酸二氢钾、盐酸、30%过氧化氢、氢氧化钠均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱柱:Diamond C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈∶0.1mol/L磷酸铵(精密称取磷酸铵20.31mg,加1000ml水使溶解并稀释至刻度,用磷酸调至pH6.8)(30∶70);流速0.8ml/min;检测波长210nm;柱温50℃;进样量20μl。柱效与不对称度取CS对照品溶液进样,理论塔板数按CS峰计算为7070。进样精密度试验取CS对照品溶液连续进样5针,其峰面积的RSD为0.008%,表明系统精密度良好。对CS对照品进行高温、氧化、强酸、强碱的破坏性试验,以研究其降解产物与主峰的分离情况。在选定的色谱条件下,取上述破坏后供试品溶液进样,结果主峰与各杂质峰获得有效分离,提示氧化和强酸破坏产生较大杂质,高温和强碱破坏总杂质量和杂质个数变化不大,表明CS在氧化、强酸条件下较不大稳定,强碱和高温对样品影响较小。精密称取CS对照品及已知含量的样品各三份,分别置于100ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度。
2.2 制成含量测定:浓度的80%、100%和120%的溶液,摇匀,滤过,进样,结果低、中、高3个浓度的回收率分别为100.1%(RSD=028%)、100.8%(RSD=1.24%)和99.8%(RSD=0.53%);平均回收率为100.2%(n=9),表明方法准确度良好。精密称定CS对照品,置25ml容量瓶中,加水使溶解,加至刻度,分别制成0.0793、0.1586、0.3172、04758和0.6344mg/ml对照品溶液按“2.1”项色谱条件进行测定,以对照品溶液浓度为横坐标,峰面积积分值为纵坐标。同一批样品,分别进样6次,依法测定含量,结果含量的RSD为0.08%,表明方法精密度良好。以信噪比≈3时,注入仪器的量确定CS的检测限为1.8ng;以信噪比≈10时,确定CS的定量限为5.9ng。在同一批样品的溶液,在0、1、2、3、4和5h分别进样进行考察溶液的稳定性,测得峰面积的积分值,结果RSD为078%,表明在室温(25℃)条件下,溶液放置6h,其主峰面积没有变化,保留时间也基本没有变化。因此,CS溶液稳定性好。
3 讨论
亚胺培南-西司他丁钠为新型β-内酰胺类抗生素,既有极强的厂谱抗菌活性,又有β-内酰胺酶抑制作用。本品具有第一代头孢菌素强大的抗革兰阳性菌的作用特点,又具有第三代头孢菌素对阴性杆菌产生的广谱β-内酰胺酶的高度稳定性,对阴性杆菌,包括耐药阴性杆菌有极强的抗菌活性,极易对β-内酰胺类抗生素产生耐药性的绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、粪链球菌、脆弱拟杆菌等,对本品也高度敏感。本品的抗菌谱几乎包括了临床上所有的有意义的致病菌部分耐甲氧西林金葡菌,D族链球菌对亚胺培南晃敏感。西司池于无抗菌作用,但在体内可抑制肾细胞分泌的脱氢肽酶,使亚胺培南免受水解破坏。用于各类敏感菌所致的感染。
西司他丁钠是一种很好的肾去氢肽酶I抑制剂,其本身不具有抗菌活性,对β内酰胺酶也无抑制作用,它是碳青霉烯类药物亚胺培南的增效剂。IMP单独给药时,经肾小球过滤或分泌后,被近端肾小管上皮细胞刷状缘中的去氢肽酶I水解失活60%-95%,导致尿中活性药物浓度降低。CS能阻抑IMP进入肾小管上皮组织,减少IMP的排泄并保护IMP在肾中不被破坏,可防止因IMP引起的肾小管坏死,减轻药物的肾毒性,增加疗效。两者合用后西司他丁减少IMP被肾小管上皮细胞的去氢肽酶水解,可使IMP的AUC增加20%,在尿中回收的原形药物多达70%,所以在制剂时IMP/CS以等量配制[1]。
本文选用季胺类离子对试剂磷酸铵。磷酸铵与CS为同种电荷,在本色谱系统中,一方面与溶剂间存在静电排斥力,另一方面作用于固定相表面,抑制溶剂的亲硅醇基团效应,达到改善对称性,提高柱效,缩短溶质保留时间。在本试验中曾用0.1mol/L的磷酸溶液,但是同样浓度下改善峰形的效果远不如磷酸铵。在流动相中加入较低浓度的磷酸调节pH至68,有助于保持峰形的对称性。在流动相的pH选择上,曾用pH5.5、pH60、H6.5以及pH6.8但都不及pH6.8,在此条件下,主峰保留时间缩短,柱效明显增加。有机相选用30%的乙腈与磷酸铵混合,是用来加快CS的出峰时间,降低柱压,提高柱效,改善主峰与杂质峰的分离度。电位滴定法测定CS含量时,共有三个突跃点,计算采用第一和第三突跃之间的滴定数差值。但是它的第一个突跃很不显著,影响结果的判定,也影响测定准确度。采用高效液相色谱法,简单、快速且准确度高。
参考文献
[1] 张建民,冯玲玲,李勇,等. 抗菌药物增效剂[J]. 中国药师,2003,6(3):172-173, http://www.100md.com
【关键词】西司他丁钠; 高效液相色谱法
【中图分类号】R927.1 【文献标识码】A 【文章编号】1008-6455(2010)08-0254-01
1 仪器与试药
岛津LC2010A型高效液相色谱仪,Waters millipore真空泵,SB5200型超声波仪,F13型酸度计,岛津MultiSpec1501紫外分光光度计。CS原料3批;CS对照品(纯度97.8%)由我市药品检验所提供;乙腈为色谱纯,磷酸铵、磷酸二氢钾、盐酸、30%过氧化氢、氢氧化钠均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱柱:Diamond C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈∶0.1mol/L磷酸铵(精密称取磷酸铵20.31mg,加1000ml水使溶解并稀释至刻度,用磷酸调至pH6.8)(30∶70);流速0.8ml/min;检测波长210nm;柱温50℃;进样量20μl。柱效与不对称度取CS对照品溶液进样,理论塔板数按CS峰计算为7070。进样精密度试验取CS对照品溶液连续进样5针,其峰面积的RSD为0.008%,表明系统精密度良好。对CS对照品进行高温、氧化、强酸、强碱的破坏性试验,以研究其降解产物与主峰的分离情况。在选定的色谱条件下,取上述破坏后供试品溶液进样,结果主峰与各杂质峰获得有效分离,提示氧化和强酸破坏产生较大杂质,高温和强碱破坏总杂质量和杂质个数变化不大,表明CS在氧化、强酸条件下较不大稳定,强碱和高温对样品影响较小。精密称取CS对照品及已知含量的样品各三份,分别置于100ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度。
2.2 制成含量测定:浓度的80%、100%和120%的溶液,摇匀,滤过,进样,结果低、中、高3个浓度的回收率分别为100.1%(RSD=028%)、100.8%(RSD=1.24%)和99.8%(RSD=0.53%);平均回收率为100.2%(n=9),表明方法准确度良好。精密称定CS对照品,置25ml容量瓶中,加水使溶解,加至刻度,分别制成0.0793、0.1586、0.3172、04758和0.6344mg/ml对照品溶液按“2.1”项色谱条件进行测定,以对照品溶液浓度为横坐标,峰面积积分值为纵坐标。同一批样品,分别进样6次,依法测定含量,结果含量的RSD为0.08%,表明方法精密度良好。以信噪比≈3时,注入仪器的量确定CS的检测限为1.8ng;以信噪比≈10时,确定CS的定量限为5.9ng。在同一批样品的溶液,在0、1、2、3、4和5h分别进样进行考察溶液的稳定性,测得峰面积的积分值,结果RSD为078%,表明在室温(25℃)条件下,溶液放置6h,其主峰面积没有变化,保留时间也基本没有变化。因此,CS溶液稳定性好。
3 讨论
亚胺培南-西司他丁钠为新型β-内酰胺类抗生素,既有极强的厂谱抗菌活性,又有β-内酰胺酶抑制作用。本品具有第一代头孢菌素强大的抗革兰阳性菌的作用特点,又具有第三代头孢菌素对阴性杆菌产生的广谱β-内酰胺酶的高度稳定性,对阴性杆菌,包括耐药阴性杆菌有极强的抗菌活性,极易对β-内酰胺类抗生素产生耐药性的绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、粪链球菌、脆弱拟杆菌等,对本品也高度敏感。本品的抗菌谱几乎包括了临床上所有的有意义的致病菌部分耐甲氧西林金葡菌,D族链球菌对亚胺培南晃敏感。西司池于无抗菌作用,但在体内可抑制肾细胞分泌的脱氢肽酶,使亚胺培南免受水解破坏。用于各类敏感菌所致的感染。
西司他丁钠是一种很好的肾去氢肽酶I抑制剂,其本身不具有抗菌活性,对β内酰胺酶也无抑制作用,它是碳青霉烯类药物亚胺培南的增效剂。IMP单独给药时,经肾小球过滤或分泌后,被近端肾小管上皮细胞刷状缘中的去氢肽酶I水解失活60%-95%,导致尿中活性药物浓度降低。CS能阻抑IMP进入肾小管上皮组织,减少IMP的排泄并保护IMP在肾中不被破坏,可防止因IMP引起的肾小管坏死,减轻药物的肾毒性,增加疗效。两者合用后西司他丁减少IMP被肾小管上皮细胞的去氢肽酶水解,可使IMP的AUC增加20%,在尿中回收的原形药物多达70%,所以在制剂时IMP/CS以等量配制[1]。
本文选用季胺类离子对试剂磷酸铵。磷酸铵与CS为同种电荷,在本色谱系统中,一方面与溶剂间存在静电排斥力,另一方面作用于固定相表面,抑制溶剂的亲硅醇基团效应,达到改善对称性,提高柱效,缩短溶质保留时间。在本试验中曾用0.1mol/L的磷酸溶液,但是同样浓度下改善峰形的效果远不如磷酸铵。在流动相中加入较低浓度的磷酸调节pH至68,有助于保持峰形的对称性。在流动相的pH选择上,曾用pH5.5、pH60、H6.5以及pH6.8但都不及pH6.8,在此条件下,主峰保留时间缩短,柱效明显增加。有机相选用30%的乙腈与磷酸铵混合,是用来加快CS的出峰时间,降低柱压,提高柱效,改善主峰与杂质峰的分离度。电位滴定法测定CS含量时,共有三个突跃点,计算采用第一和第三突跃之间的滴定数差值。但是它的第一个突跃很不显著,影响结果的判定,也影响测定准确度。采用高效液相色谱法,简单、快速且准确度高。
参考文献
[1] 张建民,冯玲玲,李勇,等. 抗菌药物增效剂[J]. 中国药师,2003,6(3):172-173, http://www.100md.com