一种新的细菌药敏试验方法的探讨
【摘要】 目的：探讨缩短细菌药物敏感试验的时间 ；方法用氯化-235三苯基四氮唑(TTC)显色培养基和普通MH培养基(K-B法)同时对我院2006年1月至4月检出的100株细菌进行药物敏感试验,并且用此两种方法对标准菌株进行次检测 ；结果95株细菌用TTC显色培养基药敏法在4h内获得结果,占95%。与M-H培养基敏感度完全相同或基本相同的占94%,对标准菌株进行的药敏试验,药敏抑菌环直径没有显著性差异； 结论该方法可以用来作为常规细菌药物敏感试验,具有快速、简便、可靠等优点。
关键词：药敏试验TTCM-H。
细菌耐药速度的快速增长是当今社会的一大难题,预防因盲目用药引起的耐药菌株的产生,配合临床尽快准确用药,微生物室的快速药敏报告显得尤为重要。利用细菌的琥珀酸脱氢酶在其生长过程中的活化作用,使无色的氯化-235三苯基四氮唑(TTC)还原为红色能更早地显示细菌生长,设计了显色快速细菌药物敏感试验方法,其结果与M-H培养基方法基本一致,而且大多数结果仅需3~4h;现报告如下:
, 百拇医药
1材料与方法
1.1 材料
1.1.1TTC培养基 (由杭州天和公司提供)。
1.1.2M-H培养基 (由杭州天和公司提供)。
1.1.3 药敏纸片 (由北京天坛药物生物公司提供)。
1.1.4 标本来源 我院2006年1月~4月送检的354份标本的100株检出菌(不包括链球菌),同时用TTC显色培养基和M-H培养基用K-B法进行药敏试验,并且用这两种药敏方法对标准菌株进行20次检测。
1.2 方法
1.2.1 制备试验菌液 将待测菌用无菌生理盐水制成0.5个麦氏单位浊度的细菌悬液。
, 百拇医药
1.2.2 涂抹平板 用无菌棉签蘸取上述菌液均匀涂抹平板。
1.2.3 贴药敏纸片 在平板上贴抗生素纸片,每皿贴6~7片,间隔不小于24mm,纸片中心距平板边缘不小于15mm。
1.2.4 孵肓 37℃孵肓2、4、6、10、18h分别取出测量抑菌环直径。
1.2.5 结果判读 按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)制定的标准进行判读。
1.2.6 质量控制 用ATCC25922、ATCC25923、ATCC27853,对所有鉴定用试剂及药敏分析用抗生素纸片进行质量控制,结果均符合预期结果和NCCLS颁布的药敏质控标准。
2 结果
2.1 TTC显色培养基药敏法与M-H法所需时间比较, 结果前者有95株细菌在4h内获得明显药敏结果,占95.0%,而M-H培养基多数需10~18h才可看结果，两者有显著差异。
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2.2 TTC显色半固体琼脂法与K-B法同时测定细菌药物敏感度的比较 100株临床标本用TTC显色琼脂法与M-H法用15片药敏纸片进行试验,前者培养4h,后者培养18h,结果敏感度完全相同的有94例,占94%。
2.3 标准菌株用TTC显色琼脂法和M-H法进行药敏试验的结果比较 15种抗菌素采用TTC培养基法和M-H法分别对三种标准菌株进行20次药敏试验,其中TTC法培养3~5h,而M-H法培养17~18h,将两者药敏抑菌环直径毫米数进行比较,没有显著性差异.
3 讨论
感染性疾病仍是临床的常见病,由于传统微生物检查结果缓慢,医生常常只凭经验用药,尤其滥用第三代头孢菌素,使感染病原体容易产生超广谱β-内酰胺酶,不但原来有效药物丧失作用,而且不致病的微生物因此携带耐药基因在菌种间传播而造成耐药菌株的出现,导致大量的院内感染,不仅给患者带来痛苦,也造成资源的浪费。鉴于细菌药物敏感试验按K-B法较费时,一些医院引进进口全自动的快速药敏智能分析系统,该系统虽然可在6~8h获取结果,但医疗成本太高,加重了病人负担;我们设计了一种试验成本低,报告时间快的TTC显色琼脂药敏方法.细菌的琥珀酸脱氢酶在其生长繁殖过程中的活化作用,使无色的TTC还原为红色物质,使培养基变红,因此纸片周围呈现红色表示耐药,若细菌被抗菌药物抑制,则无此变色能力,即只要细菌开始生长繁殖,就会出现红色变化,药敏纸片周围无变化直径达到敏感范围,就代表细菌对该药物敏感,所以,TTC显色半固体琼脂药敏法能较早判读抑菌圈的大小,本文显示在4h内有95%的菌株可得出药敏结果;M-H法没有颜色变化,只有在琼脂表面集中生长形成菌苔后,肉眼才能观察明显,故需时间较长;所以TTC法和M-H法相比不但快速而且容易观察.TTC显色琼脂药敏法药物敏感度和M-H法基本一致,而且选用标准菌株时抑菌圈二方法没有显著差异,因此结果可靠；由于抑菌环呈圆形无色,细菌生长部份为鲜红色至紫红色,对比强烈,结果极易观察和判断,而且操作简单,无须特殊设备,各级医院均可列入常规使用；但是肺炎链球菌等苛养菌要加10%的血清,结果也需7~8h才能判读,在这方面,本药敏法不理想；但是肺炎链球菌、链球菌等易为青霉素所杀灭,很少产生耐药性,可不做快速药敏试验.另外,在应用本药敏法时必须用标准菌株作平行试验,失控时立即应用M-H法,并检查各环节,这样药敏结果会更加准确可靠。
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参考文献
1 叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程[M].第二版.南京:东南大学出版社,1997.556-562.
2 李先斌,尢灿,黄彩芝,等.新生儿肺炎革兰阴性病原菌耐药性及与临床抗生素应用相关性研究[J].实用预防医学,2005,12(2):258-260.
3 vossAJ，KkuytmansJG，KoekemanL，etak.Occurrenceofyeastbloodstreamln2fectionsbetween1987and1995infiveDutchuniversityhospital[J].EurJClinMicrobiolInfectDis,1997,15:909-912.
4 王秀茹.预防医学微生物学及检验技术[M].北京:人民卫生出版社,2002.20.
5 朱忠勇.实用医学检验学[M].北京:人民军医出版社,1992.547-548., http://www.100md.com(李 慧)
关键词：药敏试验TTCM-H。
细菌耐药速度的快速增长是当今社会的一大难题,预防因盲目用药引起的耐药菌株的产生,配合临床尽快准确用药,微生物室的快速药敏报告显得尤为重要。利用细菌的琥珀酸脱氢酶在其生长过程中的活化作用,使无色的氯化-235三苯基四氮唑(TTC)还原为红色能更早地显示细菌生长,设计了显色快速细菌药物敏感试验方法,其结果与M-H培养基方法基本一致,而且大多数结果仅需3~4h;现报告如下:
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1材料与方法
1.1 材料
1.1.1TTC培养基 (由杭州天和公司提供)。
1.1.2M-H培养基 (由杭州天和公司提供)。
1.1.3 药敏纸片 (由北京天坛药物生物公司提供)。
1.1.4 标本来源 我院2006年1月~4月送检的354份标本的100株检出菌(不包括链球菌),同时用TTC显色培养基和M-H培养基用K-B法进行药敏试验,并且用这两种药敏方法对标准菌株进行20次检测。
1.2 方法
1.2.1 制备试验菌液 将待测菌用无菌生理盐水制成0.5个麦氏单位浊度的细菌悬液。
, 百拇医药
1.2.2 涂抹平板 用无菌棉签蘸取上述菌液均匀涂抹平板。
1.2.3 贴药敏纸片 在平板上贴抗生素纸片,每皿贴6~7片,间隔不小于24mm,纸片中心距平板边缘不小于15mm。
1.2.4 孵肓 37℃孵肓2、4、6、10、18h分别取出测量抑菌环直径。
1.2.5 结果判读 按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)制定的标准进行判读。
1.2.6 质量控制 用ATCC25922、ATCC25923、ATCC27853,对所有鉴定用试剂及药敏分析用抗生素纸片进行质量控制,结果均符合预期结果和NCCLS颁布的药敏质控标准。
2 结果
2.1 TTC显色培养基药敏法与M-H法所需时间比较, 结果前者有95株细菌在4h内获得明显药敏结果,占95.0%,而M-H培养基多数需10~18h才可看结果，两者有显著差异。
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2.2 TTC显色半固体琼脂法与K-B法同时测定细菌药物敏感度的比较 100株临床标本用TTC显色琼脂法与M-H法用15片药敏纸片进行试验,前者培养4h,后者培养18h,结果敏感度完全相同的有94例,占94%。
2.3 标准菌株用TTC显色琼脂法和M-H法进行药敏试验的结果比较 15种抗菌素采用TTC培养基法和M-H法分别对三种标准菌株进行20次药敏试验,其中TTC法培养3~5h,而M-H法培养17~18h,将两者药敏抑菌环直径毫米数进行比较,没有显著性差异.
3 讨论
感染性疾病仍是临床的常见病,由于传统微生物检查结果缓慢,医生常常只凭经验用药,尤其滥用第三代头孢菌素,使感染病原体容易产生超广谱β-内酰胺酶,不但原来有效药物丧失作用,而且不致病的微生物因此携带耐药基因在菌种间传播而造成耐药菌株的出现,导致大量的院内感染,不仅给患者带来痛苦,也造成资源的浪费。鉴于细菌药物敏感试验按K-B法较费时,一些医院引进进口全自动的快速药敏智能分析系统,该系统虽然可在6~8h获取结果,但医疗成本太高,加重了病人负担;我们设计了一种试验成本低,报告时间快的TTC显色琼脂药敏方法.细菌的琥珀酸脱氢酶在其生长繁殖过程中的活化作用,使无色的TTC还原为红色物质,使培养基变红,因此纸片周围呈现红色表示耐药,若细菌被抗菌药物抑制,则无此变色能力,即只要细菌开始生长繁殖,就会出现红色变化,药敏纸片周围无变化直径达到敏感范围,就代表细菌对该药物敏感,所以,TTC显色半固体琼脂药敏法能较早判读抑菌圈的大小,本文显示在4h内有95%的菌株可得出药敏结果;M-H法没有颜色变化,只有在琼脂表面集中生长形成菌苔后,肉眼才能观察明显,故需时间较长;所以TTC法和M-H法相比不但快速而且容易观察.TTC显色琼脂药敏法药物敏感度和M-H法基本一致,而且选用标准菌株时抑菌圈二方法没有显著差异,因此结果可靠；由于抑菌环呈圆形无色,细菌生长部份为鲜红色至紫红色,对比强烈,结果极易观察和判断,而且操作简单,无须特殊设备,各级医院均可列入常规使用；但是肺炎链球菌等苛养菌要加10%的血清,结果也需7~8h才能判读,在这方面,本药敏法不理想；但是肺炎链球菌、链球菌等易为青霉素所杀灭,很少产生耐药性,可不做快速药敏试验.另外,在应用本药敏法时必须用标准菌株作平行试验,失控时立即应用M-H法,并检查各环节,这样药敏结果会更加准确可靠。
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参考文献
1 叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程[M].第二版.南京:东南大学出版社,1997.556-562.
2 李先斌,尢灿,黄彩芝,等.新生儿肺炎革兰阴性病原菌耐药性及与临床抗生素应用相关性研究[J].实用预防医学,2005,12(2):258-260.
3 vossAJ，KkuytmansJG，KoekemanL，etak.Occurrenceofyeastbloodstreamln2fectionsbetween1987and1995infiveDutchuniversityhospital[J].EurJClinMicrobiolInfectDis,1997,15:909-912.
4 王秀茹.预防医学微生物学及检验技术[M].北京:人民卫生出版社,2002.20.
5 朱忠勇.实用医学检验学[M].北京:人民军医出版社,1992.547-548., http://www.100md.com(李 慧)