ＥＬＳＤ－ＨＰＬＣ法测定益正片中黄芪甲苷的含量
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袁 媛 姜 泓
摘 要：目的：建立一种准确、简便测定制剂中黄芪甲苷含量的夯析方法。方法：采用高效液相色谱法，以蒸发光散射检测器检测，采用外标二点法对数方程计算含量。结果：在色谱图中黄芪甲苷与其它色谱峰完全分离，每片含黄芪以黄芪甲苷(C41H68O14)计，不得少于0.12mg。结论：本方法的重复性好、精密度高、稳定性强。
关键词：黄芪甲苷；益正片；HPLC；ELSD
益正片为抗病毒新药，本实验采用高效液相色谱法测定方中黄芪中的黄芪甲苷的含量，以蒸发光散射检测器检测，采用外标二点法对数方程计算含量，结果表明该方法简便、重现性好，其它成分无干扰，为本制剂质量控制提供了可靠的定量方法。
1 材料与试剂
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1.1仪器 日本岛津LC-10Avp高效液相色谱仪；LC-10Avp泵；SEDEX75蒸发光散射检测器；浙大N2000色谱工作站；AS3120A超声提取器：METrLER ABl35-S十分之一电子天平(瑞士)。
1.2色谱条件DiamonsilTMC18(5μm，250mm×4.6mm)色谱柱；流动相：乙腈一水(30:70)；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测条件：漂移管温度：45℃；气流量：2.8L/min。
1.3药品益正片为糖衣片，由本实验室自制。
2 方法与结果
2.1对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.3mg的溶液，即得。
2.2供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，除去包衣，研细，取约6.0g，精密称定，加甲醇50mL，浸渍过夜，超声处理30min，滤过，药渣再加入甲醇超声处理2次(30、20mL)，每次30min，滤过，残渣用甲醇20mL洗涤，滤过，合并滤液，滤液浓缩至20mL，加于中性氧化铝柱(200～300目，24g，内径2cm)上，用40%甲醇120mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用0.5%氢氧化钠溶液30mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次(30、20、20、20mL)，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次(30、20、20mL)，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
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2.3标准曲线的绘制分别精密吸取黄芪甲苷对照品溶液4、8、12、16、20μL，按上述色谱条件进行色谱分析，以进样量对数值为横坐标，以色谱峰面积对数值为纵坐标，经回归处理，得到回归方程为Y=1.4090X+6.3559，相关系数为r=0.9999。结果表明，黄芪甲苷进样量在1.444—7.220μg范围内线性关系良好。
2.4精密度试验精密吸取同一供试品溶液，分别测定5次，结果BSD%为0.4%(n=5)，表明仪器精密度良好。
2.5重复性试验取5份同一批号的本品，分别按以上方法测定，RSD%=2.7%(n=5)，结果表明，本方法的重复性较好。
2.6稳定性试验取同一供试品溶液，每隔2h进样1次，分别测定其色谱峰面积。RSD%=2.3(n=5)，结果表明，色谱峰面积在8h内基本无变化，表明本实验条件下稳定性良好。
, 百拇医药 2.7 回收率试验取已知黄芪甲苷含量的本品5份，各2.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入黄芪甲苷对照品于量瓶中，按供试品溶液制备方法操作。注入液相色谱仪中测定，结果见表1。
2.8测定法分别精密吸取对照品溶液20、10μL及供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定，以外标两点
法对数方程计算含量，即得，结果见表2。
3 讨论
黄芪甲苷的提取方法有采用甲醇索氏提取、超声波提取，浸泡提取等，本实验对索氏提取、超声波提取进行了对比研究，结果表明，在本制剂中，以上两种不同的提取方法对黄芪甲苷的含量影响不大，因此最终采用超声提取和浸泡提取结合的方法，即甲醇浸泡过夜，再以超声进行提取。
本实验曾对甲醇提取的时间、提取的次数及水饱和正丁醇的萃取次数进行了考察，提取时间分别考察了甲醇超声提取20、30、40min，结果以30min和40min提取的黄芪甲苷的含量较高且二者含量比较接近，因此，选择甲醇超声提取30min。提取次数分别考察了甲醇超声提取1、2、3次，每次30min，结果以提取3次黄芪甲苷的含量最高，故提取工艺采用甲醇超声提取3次，每次30min。分别考察了水饱和和正丁醇萃取3、4、5次的黄芪甲苷的含量，结果表明，萃取4次基本萃取完全。
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蒸发光散射检测器(evaporative light-scattering detec-tor ELSD)是一种新型的质量型检测器，在用于无紫外吸收的物质的分析中具有相当的优势。，其检测原理是把从色谱柱分离的组分雾化为小颗粒，在其穿过光束时导致光散射而被检测。故ELSD的响应不依赖样品的化学性质，任何挥发性低于流动相的样品均能被检测，且响应因子一致。用EISD测定不仅灵敏度得到很大提高，而且应用梯度洗脱时基线平稳。漂移管温度和载气流速是检测器的两个重要参数，温度低时，溶剂挥发不够完全；温度高时，由于分析样品部分挥发导致检测器响应下降，载气流速太低时，会形成大量微滴，从而导致尖峰信号或噪音信号；另一方面当载气流速太高时微滴会大量下降，导致信号响应降低。本实验以使用手册推荐值为起点，逐步改变漂移管温度和载气流速，观察基线噪音，发现在温度45℃，载气流速2.8L/min条件下，噪声最小，此时信号最强，故采用该条件进行测定。, 百拇医药(刘 君等)