大黄(庶／虫)虫合剂对小鼠Ｔ细胞亚群影响的实验研究
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摘 要：目的：通过检测黄(庶/虫)虫合剂对实验性免疫低下小鼠及正常小鼠脾脏T细胞亚群的影响。探讨该合剂对免疫功能的调节作用。方法：选取昆明种小鼠100只，雌雄各半。其中50只腹腔注射环磷酰胺1.6mg/0.2mL/只，每天给药1次，连续3天，造成免疫低下小鼠，然后随机分为模型组、中药对照组(六味地黄组)、西药对照组(卡介菌多糖组)、小剂量组、大剂量组；其余50只随机分为正常空白对照组(即生理盐水组)、中药对照组、西药对照组、小剂量组、大剂量组。上述各组连续用药3天后，处死小鼠摘取脾脏，用免疫组化的检测T细胞亚群含量。结果：大黄(庶/虫)虫合剂能显著提高正常小鼠和免疫功能低下小鼠CD+4、CD+8的百分率及CD+4、CD+8比值(统计学处理P<0.05)。结论：大黄(庶/虫)虫合荆可通过增强小鼠T淋巴细胞的免疫水平。有效地提高集体的免疫功能。
关键词：大黄廑虫舍荆；环磷酰胺；免疫调节；T细胞亚群
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中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)07-1406-02
大黄(庶/虫)虫合剂以仲景名方大黄(庶/虫)虫丸为基础方由大黄、干地黄、(庶/虫)虫、甘草、桃仁等药物组成。具有活血化瘀、缓中补虚之效。临床多用于治疗乙肝、肝硬化、肿瘤等免疫失调性疾病，疗效确凿。但相关的免疫作用机理却少有研究。本实验主要通过观察大黄(庶/虫)虫合剂对小鼠T细胞亚群的影响，探讨其免疫作用机制，为临床治疗提供科学数据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物昆明种小鼠100只，体重为(20±2)g，雌雄各半。
1.1.2 实验药物大黄(庶/虫)虫合剂(将本方药物浸提、净化、浓缩、制成合剂，每瓶100mL。由山西中医学院附属医院制剂室提供)；六味地黄丸(北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂提供，批号为Z19993068，粉碎研磨后，经100目过筛制成散剂)；卡介菌多糖核酸注射液(湖南九芝堂斯奇生物制药有限公司，批号为S20020019)；环磷酰胺(江苏恒瑞医药有限公司提供，批号为403501)。
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1.1.3 实验试剂 CD4、CD免疫组化试剂盒(上海森雄
1.1.4 实验仪器IL-4012-1型回转式切片机(由浙江金华无线电厂提供)；CS-V工型摊片烤片机(由孝感市宏业医用仪器有限公司提供)。
1.2 实验方法
1.2.1 试剂配制大黄(庶/虫)虫合剂灌胃液的制备：取大黄(庶/虫)虫合剂加蒸馏水溶解，分别配制成实验所需的低浓度92mg/0.4mL和高浓度368mg/0.4mL溶液。六味地黄灌胃液的制备：取六味地黄丸粉碎后加蒸馏水溶解，配制成浓度为63mg/0.4mL的溶液。卡介菌多糖注射液的制备：将卡介菌多糖配成浓度为0.125mg/0.2mL。环磷酰胺注射液的制备：将环磷酰胺加生理盐水配制成浓度为1.6mg/0.2mL的溶液。
1.2.2 分组及给药将100只小鼠，随机分成两大组：正常实验组和免疫功能低下组，各50只，正常组再随机分成5组(具体剂量参考陈奇主编的《中药药理实验方法学》按体表面积折算方法进行计算：生理盐水组：腹腔注射生理盐水0.4mL/只；中药对照组：六味地黄丸水溶液灌胃63mg/(0.4mL·只)；西药对照组：腹腔注射卡介菌多糖0.125mg/(0.2mL·只)；小剂量组：低浓度大黄(庶/虫)虫合剂灌胃92mg/(0.4mL·只)；大剂量组：高浓度大黄(庶/虫)虫合剂灌胃368mg/(0.4mL·只)。免疫功能低下组小鼠腹腔注射环磷酰胺每只1.6mg/0.2mL，1次/天，连续3天。然后再随机分成5组，其中1组作为环磷酰胺对照组，其余4组分别为环+中药对照组、环+西药对照组、环+小剂量组、环+大剂量组，给药同上述方法，1次/天，连续3天。
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1.3 检测项目与方法
最后1次给药24h后，摘眼球处死小鼠，将取出的脾脏固定于10%的多聚甲醛液中6-8h，经酒精梯度脱水后进行石蜡包埋，在IL-4012-t型回转式切片机上将组织切成厚度为4μm的薄片，置于CS-VI型摊片烤片机上，将均匀摊片后的组织载于玻片上，静置2min，放于37℃的烤片机内令其干燥，用免疫组化的方法进行T细胞亚群的测定。显微镜下计数200个细胞，计算阳性细胞(细胞膜着色呈棕黄色)的百分率。
1.4 统计学方法
所有实验数据均以x±s表示，组间检验采用t检验。
2 结 果
2.1 大黄(庶/虫)虫合剂对正常小鼠T细胞亚群的影响
从表1可以看出，中药对照组、西药对照组、实验药物的大小剂量组CD+4、CD+4/CD+8比值均高于生理盐水组(P<0.05，P<0.01)具有统计学意义；实验药物大剂量与小剂量比，组间作用差异性不显著；各组CD+8均无差异。
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2.2 大黄(庶/虫)虫合剂对免疫抑制小鼠T细胞亚群的影响
由表2可见，模型组CD+4显著低于生理盐水组，表明免疫抑制动物模型已经建成；环磷酰胺+西药对照组、环磷酰胺+中药对照组及实验药物的大小剂量组CD+4显著高于环磷酰胺组表明实验药物的大、小剂量、卡介菌多糖及六味地黄丸均能使被环磷酰胺抑制的免疫功能显著提高；与模型组比较差异性显著(P<0.05)；但都不能使CD+4恢复正常；各组间CD+8差异性不显著；环磷酰胺+西药对照组及实验药物的大小剂量组CD+4/CD+8比值明显高于环磷酰胺组(P<0.05)。环磷酰胺+中药对照组对CD+4/CD+8比值影响不明显。
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3 讨 论
现代研究发现，中医的“虚证”(无论阴虚、阳虚、气虚、血虚)患者均显示细胞免疫功能低下。而机体正常的免疫过程依赖于各种免疫细胞，尤其是T细胞亚群之间的相互协作、相互制约。其中CD4与CD4起着重要的调节作用，正常情况下两者处于动态平衡，当两者数目发生变化时，可能就会出免疫调节的失衡。因此测定外周血中T细胞亚群及比值是反映机体免疫平衡状况的一个重要指标。当CD+4/CD+8比值上升，提示正相免疫调节占优势；CD+4/CD+4比值下降，提示负相免疫调节占优势，当比值下降甚至小于1时，提示细胞免疫功能低下。本次实验结果表明：大黄(庶/虫)虫合剂能显著提高正常小鼠及免疫抑制小鼠CD+4T细胞计数，有效的提高CD+4/CW+8比值，拥有较好的正性生物反映调节作用。这可能是其提高机体免疫功能的作用之一。, 百拇医药(耿 挺 王 笈)
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