HPLC法测定复方连芍片中盐酸小檗碱的含量
摘要：目的：建立复方连芍片中盐酸小檗碱的含量测定方法；方法：色谱柱为Hypersil ODS2 C18柱(200mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈：0.05mol/L磷酸二氢钾(48:52)，每100mL流动相中加入十二烷基磺酸钠0.17g：流速为1.0mL/min；检测波长为345nm；结果：盐酸小檗碱在0.064-0.64μg范围内线性关系良好，r＝0.9998：平均回收率为99.5%，RSD为1.2%；结论：本方法简便可行，重复性好，适用于该制剂的质量控制。
关键词：盐酸小檗碱；复方连芍片；HPLC
中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)09-1959-02
复方连芍片是由黄连、白芍、蒲黄等中药组成，经提取精制而成的薄膜包衣片，具有益气健脾、清热祛湿的作用，临床上用于治疗慢性溃疡性结肠炎。黄连为方中君药，其主要成分是以盐酸小檗碱为代表的季铵型生物碱。笔者采用HPLC法对该制剂中的盐酸小檗碱进行了含量测定，结果表明该法具有简便快捷，准确度高，重复性好等特点，可作为复方连芍片的质量控制指标。
, 百拇医药
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪(美国HP公司)，VWD紫外检测器，浙江大学N2000色谱工作站；TU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器公司)；SB3000-超声振荡器(上海必能信公司)
盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号为0713-9906；复方连芍片(本院自制，批号：050312、050319、050326)；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为Hypersil ODS2 C18柱(200mm ×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈：0.05mol/L磷酸二氢钾(48:52)，每100mL流动相中加入十二烷基磺酸钠0.17g；流速为1.0mL/min；柱温为25℃；检测波长为345nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于6000。
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2.2 供试品溶液制备 取本品10片，刮去薄膜衣，研细，取0.5g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，加甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成0.064mg/mL的对照品溶液。
2.4 阴性样品溶液的制备取缺黄连的药材，同制备成阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备成阴性样品溶液。
2.5检测波长的确定取盐酸小檗碱对照品溶液在200-500nm波长处扫描，结果盐酸小檗碱在345nm处有最大吸收峰，故确定检测波长为345nm。
2.6 线性范围的考察 分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液2、4、6、8、10μL，按上述色谱条件进样测定。以盐酸小檗碱的浓度(X)为横坐标，峰面积积分值(A)为纵坐标，作线性回归，得回归方程A=4.23×I06X-1.51×105，r＝0.9998，试验结果表明盐酸小檗碱在0.064-0.64μg的浓度范围内与峰面积线性关系良好。
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2.7 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL，重复进样5次，按上述色谱条件测定，结果盐酸小檗碱峰面积的RSD为0.9%(n=5)。
2.8 稳定性试验 精密吸取同一供试品液10μL，分别于0、2、4、6、8、10h进样测定，计算盐酸小檗碱的含量，结果RSD为1.3%(n=6)，表明供试品溶液在10h内基本稳定。样品
2.9.重复性试验 取同一批号(批号：050312)的样品5份，分别按2.2项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件分别进行测定，计算盐酸小檗碱的含量，结果RSD为2.1%(n=5)。
2.10 加样回收率试验 取已知含量的样品(批号：050312)适量，刮去膜衣，研细，取5份，精密称定，分别精密加入盐酸小檗碱对照品溶液适量，按2.2项下方法进行处理，依法测定盐酸小檗碱含量，计算回收率。结果平均回收率为99.5%，RSD为1.2%(n=5)。
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2.11 样品测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，结果3批样品(批号分别为050312、050319、050326)中盐酸小檗碱的含量分别为22.7、23.5、22.9mg/片，RSD为1.8%。
3 讨 论
供试品的处理采用甲醇直接超声提取的方法，操作简单易行，经HPLC检测，杂质峰干扰较小。流动相曾采用乙腈：0.05mol/L磷酸二氢钠(30:70，磷酸调pH至3)、甲醇：乙腈：0.1%磷酸(10:28:62)等，结果色谱峰拖尾现象较为严重，分离度差；后改用本文中采用的流动相，各峰之间均能达到较好的分离，加入适量十二烷基磺酸钠离子对试剂后，色谱峰的拖尾现象得到了有效地改善，且对称性较好。, http://www.100md.com(刘春海 杨华生 李 超)
关键词：盐酸小檗碱；复方连芍片；HPLC
中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)09-1959-02
复方连芍片是由黄连、白芍、蒲黄等中药组成，经提取精制而成的薄膜包衣片，具有益气健脾、清热祛湿的作用，临床上用于治疗慢性溃疡性结肠炎。黄连为方中君药，其主要成分是以盐酸小檗碱为代表的季铵型生物碱。笔者采用HPLC法对该制剂中的盐酸小檗碱进行了含量测定，结果表明该法具有简便快捷，准确度高，重复性好等特点，可作为复方连芍片的质量控制指标。
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1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪(美国HP公司)，VWD紫外检测器，浙江大学N2000色谱工作站；TU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器公司)；SB3000-超声振荡器(上海必能信公司)
盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号为0713-9906；复方连芍片(本院自制，批号：050312、050319、050326)；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为Hypersil ODS2 C18柱(200mm ×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈：0.05mol/L磷酸二氢钾(48:52)，每100mL流动相中加入十二烷基磺酸钠0.17g；流速为1.0mL/min；柱温为25℃；检测波长为345nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于6000。
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2.2 供试品溶液制备 取本品10片，刮去薄膜衣，研细，取0.5g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，加甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成0.064mg/mL的对照品溶液。
2.4 阴性样品溶液的制备取缺黄连的药材，同制备成阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备成阴性样品溶液。
2.5检测波长的确定取盐酸小檗碱对照品溶液在200-500nm波长处扫描，结果盐酸小檗碱在345nm处有最大吸收峰，故确定检测波长为345nm。
2.6 线性范围的考察 分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液2、4、6、8、10μL，按上述色谱条件进样测定。以盐酸小檗碱的浓度(X)为横坐标，峰面积积分值(A)为纵坐标，作线性回归，得回归方程A=4.23×I06X-1.51×105，r＝0.9998，试验结果表明盐酸小檗碱在0.064-0.64μg的浓度范围内与峰面积线性关系良好。
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2.7 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL，重复进样5次，按上述色谱条件测定，结果盐酸小檗碱峰面积的RSD为0.9%(n=5)。
2.8 稳定性试验 精密吸取同一供试品液10μL，分别于0、2、4、6、8、10h进样测定，计算盐酸小檗碱的含量，结果RSD为1.3%(n=6)，表明供试品溶液在10h内基本稳定。样品
2.9.重复性试验 取同一批号(批号：050312)的样品5份，分别按2.2项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件分别进行测定，计算盐酸小檗碱的含量，结果RSD为2.1%(n=5)。
2.10 加样回收率试验 取已知含量的样品(批号：050312)适量，刮去膜衣，研细，取5份，精密称定，分别精密加入盐酸小檗碱对照品溶液适量，按2.2项下方法进行处理，依法测定盐酸小檗碱含量，计算回收率。结果平均回收率为99.5%，RSD为1.2%(n=5)。
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2.11 样品测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，结果3批样品(批号分别为050312、050319、050326)中盐酸小檗碱的含量分别为22.7、23.5、22.9mg/片，RSD为1.8%。
3 讨 论
供试品的处理采用甲醇直接超声提取的方法，操作简单易行，经HPLC检测，杂质峰干扰较小。流动相曾采用乙腈：0.05mol/L磷酸二氢钠(30:70，磷酸调pH至3)、甲醇：乙腈：0.1%磷酸(10:28:62)等，结果色谱峰拖尾现象较为严重，分离度差；后改用本文中采用的流动相，各峰之间均能达到较好的分离，加入适量十二烷基磺酸钠离子对试剂后，色谱峰的拖尾现象得到了有效地改善，且对称性较好。, http://www.100md.com(刘春海 杨华生 李 超)