治疗白癜风外用中药对大鼠皮肤微环境的影响(1)
摘要：目的：从调节局部免疫、影响黑素细胞黑素合成和迁移3个方面研究外用中药对大鼠皮肤的作用。方法：用中药乙醇提取液外涂大鼠背部皮肤，3周后活检取材，用半定量RT—PCR检测酪氨酸酶(tyrosinase，TYR)、干细胞生长因子(stem cell factor，SCF)、干细胞生长因子受体(stem cell factor receptor，c-KIT)、白介素-2(intedeukine-2，IL-2)和肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor—a，TNF—a)tuRNA的含量。结果：中药3、5、6、7外用后，大鼠皮肤中scF mRNA表达显著增加，分别为对照组的2.59倍、5.82倍、2.60倍和3.74倍(P260nm/A280nm为1.7～1.90置-70℃保存备用。
2.3 合成
eDNA取总RNA 2μg按照M-MLV逆转录酶说明书步骤进行操作获得eDNA。反应体系内含：5×RT缓冲液、M—MLV、RNasin、dNTPs、Oligo dT15，加无RNA酶水至总体积25μL。
2.4 PCR扩增
取eDNA 2μL进行PCR反应，反应体系内含：10×PCR缓冲液、Mgcl2、dNTPs、Taq酶、eDNA、引物，加双蒸水至总体积25μL。反应条件为：预变性94℃ 2min；变性94℃30s，退火：β-aetin、SCF和TYR为60℃ 45s，c-KIT为68℃45s，TNF-a为56℃45s，IL-2为55℃45s，延伸72℃60s，35个循环；最后72℃延伸10min。
2.5 电泳和图像分析
取PcR产物6μL经1.5%琼脂糖凝胶电泳后，在凝胶扫描仪上观察结果，拍照记录并用Quantity One-4.3.0软件测定扩增产物的光密度值，分别计算TYR、SCF、c-KIT、iL-2和TNF-a与β—actin光密度值的比值，以此代表上述指标mRNA的相对表达水平。
2.6 统计分析
所测数据采用成组t检验，使用SPSS1 3.0统计软件进行数据处理及分析。
3 结果
透骨草和浮萍的混合提取液及白芷、蛇床子和补骨脂的混合提取液均显著抑制大鼠皮肤IL-2和TNF-amR-, 百拇医药(张迪敏 许爱娥 常淑彪 李永伟 尉晓冬)
2.3 合成
eDNA取总RNA 2μg按照M-MLV逆转录酶说明书步骤进行操作获得eDNA。反应体系内含：5×RT缓冲液、M—MLV、RNasin、dNTPs、Oligo dT15，加无RNA酶水至总体积25μL。
2.4 PCR扩增
取eDNA 2μL进行PCR反应，反应体系内含：10×PCR缓冲液、Mgcl2、dNTPs、Taq酶、eDNA、引物，加双蒸水至总体积25μL。反应条件为：预变性94℃ 2min；变性94℃30s，退火：β-aetin、SCF和TYR为60℃ 45s，c-KIT为68℃45s，TNF-a为56℃45s，IL-2为55℃45s，延伸72℃60s，35个循环；最后72℃延伸10min。
2.5 电泳和图像分析
取PcR产物6μL经1.5%琼脂糖凝胶电泳后，在凝胶扫描仪上观察结果，拍照记录并用Quantity One-4.3.0软件测定扩增产物的光密度值，分别计算TYR、SCF、c-KIT、iL-2和TNF-a与β—actin光密度值的比值，以此代表上述指标mRNA的相对表达水平。
2.6 统计分析
所测数据采用成组t检验，使用SPSS1 3.0统计软件进行数据处理及分析。
3 结果
透骨草和浮萍的混合提取液及白芷、蛇床子和补骨脂的混合提取液均显著抑制大鼠皮肤IL-2和TNF-amR-, 百拇医药(张迪敏 许爱娥 常淑彪 李永伟 尉晓冬)