滋阴活血润肠法对烫伤大鼠肠黏膜屏障的影响
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摘要：目的：了解和揭示滋阴活血润肠法对SD大鼠烫伤后1周内血浆肿瘤坏死因子、内毒素、肠组织细胞凋亡的影响，探讨本法对肠黏膜屏障保护作用的机制，以期为临床探寻更有效的肠黏膜保护药物。方法：将SD大鼠70只随机分成3组，第1组为滋阴活血润肠中药治疗组(便可通组)30只；第2组为对照组(单纯烫伤组)30只，制备成烫伤模型，分别予以便可通、生理盐水灌胃；第3组为正常组10只。均检测血浆肿瘤坏死因子、内毒素的含量；观察大鼠肠组织细胞凋亡的变化。结果：滋阴活血润肠法可明显抑制烫伤模型大鼠内毒素易位，减少肿瘤坏死因子的产生，抑制肠组织细胞凋亡。结论：中医滋阴活血润肠法有较理想的肠道屏障保护作用，是预防和治疗肠道屏障功能障碍引发的多器官、多系统功能衰竭的重要方法之一。
关键词：滋阴活血润肠法；烫伤大鼠；肠黏膜屏障
中图分类号：R-33 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2008)04-0730-03
笔者采用烫伤法制作烫伤模型，予以滋阴活血润肠中药抑制烫伤大鼠肿瘤坏死因子的过度产生及肠组织细胞的过度凋亡；预防肠道屏障功能障碍引发的内毒素血症；观察滋阴活血润肠法对肠黏膜屏障的保护作用机制。
1实验材料
1.1药物
滋阴活血润肠法采用本院临床使用的医院制剂便可通，处方组成如下：生地15g，玄参15g，桃仁9g，当归9g，肉苁蓉10g，草决明12g，大黄6g，芦荟3g，每片含生药0.6g(批号：20020811)。
1.2试剂
内毒素鲎试剂盒购自上海伊华临床医学科技公司；肿瘤坏死因子试剂盒为北京东亚免疫技术研究所产品；细胞凋亡试剂盒购自BM公司。
1.3实验大鼠
SD大鼠70只，雌雄各半，体重180～220g，由湖南省防疫站大鼠实验室提供(合格证书编号:000345)。
2方法
2.1药物的配制
便可通，70kg成人临床推荐用量为7.2g/日，200g大鼠等效量按成人的0.018倍计算，7.2×0.018/0.2≈0.6(g/kg)。
2.2烫伤模型的制备及给药方法
模型制备：动物禁食过夜，实验动物腹腔内注射戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉后，背部脱毛，将背部浸于沸水中12s，造成背部8×4.5cm2Ⅲ度烫伤，伤后1h，腹部皮下注射生理盐水50mL/kg抗休克，创面涂20%磺胺嘧啶银糊剂，单笼喂养，自由进食水。
给药方法：将实验大鼠随机分成3组，第1组为治疗组(便可通组)30只，第2组为对照组(单纯烫伤组)30只，第3组为正常组10只。
第1组为治疗组给便可通片剂，以50mg/kg/日剂量分2次给药，第2组为对照组给生理盐水灌胃(1mL/100g)分别在第1日、第3日、第7日麻醉，无菌操作下剖腹并行主动脉穿刺抽血处死。第3组为正常组，直接按上述方法处死进行空白对照。
2.3血浆内毒素测定
凡与鲎试剂接触物件均需灭菌和去热源处理。无菌操作下取血1mL，肝素抗凝，500r/min离心5min,取血浆0.1mL，加入无热源蒸馏水0.2mL、Tris-HCL缓冲液0.2mL，混匀，置于100℃水浴加热10min，3000r/min离心10min，取上清液，于波长545nm处测光密度值。根据内毒素标准曲线查得标本内毒素含量。
2.4肿瘤坏死因子测定
采用放免法，严格按试剂盒的要求操作。
2.5肠组织凋亡细胞的定量及分级方法
采用TUNEL法(BM公司试剂盒提供的方法)，光学显微镜观察记数。计算方法：计算5个高倍视野(×400)下的细胞数。凋亡指数以每项100个细胞中的凋亡细胞表示，按凋亡细胞占细胞总数的百分率将其分为5级，0级：40%。
2.6统计方法
结果为计量资料，以±s表示，采用SPSS11.0软件包分析处理；组间比较方差齐时，采用方差分析(最小显著差法，LSD)，如方差不齐，则采用近似方差分析(Tamhane′s T2)；治疗前后比较采用配对T检验(Paired samples Test)。
3结果
3.1滋阴活血润肠法对烫伤模型大鼠血浆内毒素的影响
与正常组比较，烫伤模型大鼠血浆内毒素含量明显增加。与对照组比较，便可通治疗后3天、7天均可使大鼠血浆内毒素含量明显减少 (表1)。
3.2滋阴活血润肠法对烫伤模型大鼠肿瘤坏死因子的影响
与正常组比较，烫伤模型大鼠血浆肿瘤坏死因子含量明显增加。与对照组比较，便可通治疗后7天可使大鼠血浆肿瘤坏死因子含量明显减少，见表2。
2.3滋阴活血润肠法对烫伤模型大鼠肠组织细胞凋亡的影响
与正常组比较，烫伤模型大鼠肠组织细胞凋亡明显增加。与对照组比较，便可通治疗后3天、7天可使大鼠肠组织细胞凋亡明显减少 (表3)。
3讨论
严重的创伤、感染以及休克等外科危重症时,肠黏膜屏障的受损及其所致的细菌易位是多器官功能衰竭发生的重要机制之一,这已为大量的临床及实验研究所证实[1]。如何保护肠黏膜屏障以防止细菌易位正成为各国学者所关注的热点之一。
机体在休克、严重创伤、感染、重大手术的应激状态下，胃肠黏膜缺血—再灌注，自由基损伤，细菌、内毒素直接作用，细胞因子影响等因素共同导致黏膜损伤，导致肠黏膜屏障破坏，细菌、内毒素易位进入血液循环，形成肠源性感染，内毒素血症，而内毒素又诱导单核巨噬细胞大量分泌TNF、IL-1、IL-6、IL-8等，引起细胞因子所谓“瀑布样”爆发，机体整个内环境系统失衡，反过来进一步加重肠道屏障功能的破坏；细菌易位过程又促进全身免疫障碍[2]，同时内毒素易抑制特异性免疫功能，并诱导激活肠道淋巴细胞中抑制性T细胞，继而移行至全身淋巴系统。在内毒素及TNF作用下导致肠道平滑肌细胞线粒体膜电位显著增高，内膜的通透性增加从而导致细胞程序性死亡。并在一定条件下激发细胞因子的连锁反应和毒性网络，引起全身各器官的损害[3]。使系统炎症反应加剧、失控，最终引起MODS[4]。
本实验中与正常组比较，对照组和治疗组血浆中肿瘤坏死因子、内毒素的含量明显增多、肠组织细胞凋亡过度，予以滋阴活血润肠中药治疗后明显减少了肿瘤坏死因子、血浆内毒素含量，减少了肠组织的细胞凋亡，且治疗时间越长效果越明显。表明滋阴活血润肠中药能调节机体免疫功能，减少肿瘤坏死因子、血浆内毒素及其他炎性因子对肠黏膜屏障的损伤，抑制肠组织细胞的过度凋亡，从而有效的保护了肠黏膜屏幕，阻断了由细胞因子引起的连锁反应和毒性网络，防护了免疫细胞的损伤，具有较强的免疫调节功能。现代研究表明生地主要含苷类、糖类、氨基酸类，具有滋阴生津和抗衰老作用，能增强免疫功能、强心、清除超氧自由基及抗肿瘤等多种功效；玄参具有改善微循环及毛细血管通透性，增强心肌收缩力和耐氧能力[5]；桃仁具有改善血流动力学，抑制血小板积聚集、血栓形成、扩张血管、增强血流量及抗炎、抗组织细胞过氧化损伤作用[5]；当归、肉苁蓉具有抗氧化、清除氧自由基及抗血小板聚集作用、具有增强体液、细胞免疫及抗炎、抗菌、抗损伤等多种作用[5]。大黄能兴奋肠壁M样受体,促进肠蠕动,消除肠麻痹；能保护肠黏膜的完整性,具有防止或修复黏膜损伤的功能。大黄还可以促进肠黏膜杯状细胞的增生,分泌黏液保护肠黏膜,减少通透性,阻止毒素与上皮细胞接触,能保护细胞间紧密连接,维持细胞结构的完整性[6]。芦荟能促进胃液分泌、兴奋肾上腺皮质及抗炎和促进伤口愈合。
综上所述，该方通过多成分、多环节、多靶点保护肠黏膜屏障，提高肠黏膜屏障的免疫监视和生物屏障功能；中医滋阴活血润肠法有较理想的肠道屏障保护作用，为预防和治疗严重的创伤、感染以及休克等外科危重症时多器官功能衰竭的有效方法之一。
参考文献
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[2]Deith EA,XuD,LuQ,et al.Bacterial translocation from the gut impairssystemic immunity[J].surgery,2001,109:269.
[3]Deitch EA,Multiple system orgam failure[J].Ann Surg.1992,216(20):111-134.
[4]Border JR.Multiple system organ failture[J].Ann surg.1992,216:111-116.
[5]杨卫平，王世青，冯泳，等.临床常用中药手册[M].贵阳:贵州科技出版社,2001：110-112，573-574，818-880.
[6]康复笑,韩宜印,何淑贤,等.生大黄促进术后胃肠功能恢复的临床观察[J].中国中西医结合外科杂志,2002,8(3):168., http://www.100md.com(郑爱华 蔡光先 王银山 周 兵)